基于蛋白質組學技術的蚯蚓纖溶酶分析方法研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、蚯蚓纖溶酶(EFE)是從蚯蚓中提取的一組絲氨酸蛋白酶。EFE具有降低血液黏稠度、減少血小板聚集、改善微循環(huán)、副作用小的特點，已大量應用于臨床，治療多種血栓性疾病，并取得較好的療效。中科院生物物理所以赤子愛勝蚓為原料已制成用于預防和治療血栓的口服膠囊。實際上，該膠囊（蚓激酶粗品）含有多種活性組分。為了便于對蚯蚓纖溶酶藥物的生產(chǎn)過程進行質量控制，急需建立一套完整的質控標準方法，為這種藥物的生產(chǎn)及開發(fā)提供質量保證。通過對EFE的研究現(xiàn)狀調查表

2、明，由于各種纖溶酶組分的理化性質比較接近，使分離純化工作具有很大的挑戰(zhàn)性。
　　本研究利用不同分離方法對蚯蚓纖溶酶粗品中全蛋白組分進行分離，建立了基于強陰離子交換色譜和SDS-PAGE的最佳分析、分離方法。在最佳凝膠電泳分離條件下分離出多達20個蛋白質條帶，分別通過MALDI-TOF-MS和2D-LC-MS/MS質譜對各蛋白質條帶進行了鑒定。在最佳色譜條件分離出了約35個峰，將其分為26個組分，分別用MALDI-TOF-MS和Q-

3、TOF-MS對各組分中蛋白的分子量進行了準確測定?；凇癝hotgun”研究策略的蛋白質組學研究方法，采用了蛋白質數(shù)據(jù)庫和EST（表達序列標簽）數(shù)據(jù)庫兩種對蚯蚓纖溶酶進行了鑒定:使用蛋白數(shù)據(jù)庫(Lumbricidaesequence)得到20種不同的蛋白;而使用EST形式數(shù)據(jù)庫(Lumbricidae sequence)得到了57種不同的mRNA序列。本文應用蛋白質組學的研究方法對蚯蚓纖溶酶粗品進行分析及鑒定，建立了蚯蚓纖溶酶藥物質量控

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