AS-NGR基因在中國鹵蟲胚胎發(fā)育，漸度、鹽度脅迫和蛻皮激素誘導下的表達模式.pdf

1、中國鹵蟲(Artemia sinica)是一種對環(huán)境適應能力極強的小型甲殼動物，能在高鹽水體中生存，由于其生活方式的獨特性，目前已成為分子生物學、遺傳學、發(fā)育生物學等研究中重要的模式生物。
　　神經(jīng)肽及神經(jīng)肽受體是近年來神經(jīng)科學研究方面的熱點問題，其在各類甲殼動物的生長、發(fā)育、繁殖、運動等生理過程所起到的調(diào)節(jié)作用也越來越受到人們關注。鹵蟲作為一種小型甲殼動物，其體內(nèi)也必然存在著神經(jīng)肽與神經(jīng)肽受體并參與鹵蟲的相關生理調(diào)節(jié)，但目前對鹵

2、蟲神經(jīng)肽及受體的相關研究卻尚未見報道。
　　本研究采用RACE技術，首次從中國鹵蟲中克隆出一個神經(jīng)肽受體的cDNA全長序列，命名為As-NGR。采用生物信息學手段對該序列進行了信息學分析;應用原位雜交技術對As-NGR在中國鹵蟲胚胎發(fā)育不同時期的表達部位進行了研究;應用熒光實時定量PCR技術對鹵蟲不同發(fā)育時期，鹽度、溫度脅迫和蛻皮激素誘導下As-NGR的表達量進行了研究。
　　實驗結果顯示，As-NGR cDNA序列全長16

3、10bp，含一個1527bp的開放閱讀框，59bp的5'-非編碼區(qū)(UTR）和24bp3'-非編碼區(qū)(UTR)。對該序列進行信息學分析發(fā)現(xiàn)，As-NGR編碼的蛋白質(zhì)包含508個氨基酸，分子量為60.8kD，理論等電點為5.73，含有7TM_1和7TM_GPCR_Srw兩個結構域，是一個7次跨膜的疏水蛋白，屬于G蛋白偶聯(lián)受體視紫紅質(zhì)家族。
　　As-NGR廣泛分布于鹵蟲胚胎發(fā)育的各個時期和身體的各個部位，且不同發(fā)育時期的相對表達量有

4、所不同。鹵蟲發(fā)育為無節(jié)幼蟲前，其體內(nèi)As-NGR的表達量偏低且變化幅度不大，發(fā)育為無節(jié)幼蟲后，As-NGR的表達量上調(diào)，且在5d、7d上調(diào)幅度明顯。隨著鹽度的增加與溫度的下降，As-NGR的表達量均呈逐漸下調(diào)趨勢，且均低于正常水平。蛻皮激素誘導處理1h，As-NGR在有明顯的升高，2h時又迅速下降，趨于正常水平。
　　本研究結果表明，As-NGR在鹵蟲體內(nèi)的作用可能并非應答溫度鹽度刺激信號，而是在蛻皮前期神經(jīng)調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用的一