結核病防治實驗室痰檢工作

1、第一節(jié) 結核病防治實驗室痰檢工作,第三章 結核病管理及最新進展,第一講 痰涂片鏡檢,本節(jié)內(nèi)容導航,,痰檢工作的目的和意義國家結核病規(guī)劃（NTP） 與結核病細菌學實驗室網(wǎng)絡檢查對象結核菌的形態(tài)和結構,電子顯微鏡下的結核分枝桿菌染色特性萋尼氏染色鏡下形態(tài),,本節(jié)內(nèi)容導航,痰涂片操作程序常見標本的收集及處理痰標本的采集－容器痰標本的采集留取標本痰標本的運送標本的性狀直接涂片的步驟染色的步驟,痰檢工作

2、的目的和意義,在結核病控制工作中痰結核菌涂片鏡檢對于發(fā)現(xiàn)傳染源、確定診斷和化療方案、考核療效、評價防治效果具有重要意義 是國家結核病控制規(guī)劃(NTP) 的重要組成部分，在現(xiàn)代結核病控制工作中起著不可缺少的重要作用,1,2,國家結核病規(guī)劃（NTP）與結核病細菌學實驗室網(wǎng)絡,結核病細菌學實驗室通過日常、有效的細菌學（病原學）診斷，發(fā)現(xiàn)傳染源、決定化療方案和評價治療效果為實現(xiàn)NTP的重要目標服務 痰涂片鏡檢服務必

3、需在健全的細菌學實驗室網(wǎng)絡中才能實現(xiàn),1,2,國家結核病規(guī)劃（NTP）與結核病細菌學實驗室網(wǎng)絡,結核病高負擔國家NTP主要通過實施現(xiàn)代結核病控制策略（DOTS）來實現(xiàn) 痰涂片鏡檢是結核病細菌學實驗室服務中最重要的內(nèi)容之一。痰涂片鏡檢發(fā)現(xiàn)傳染源是DOTS策略的重要組成部分,3,4,,結核病癥狀體征,咳血或伴有血痰,發(fā)熱或胸痛超過2周,持續(xù)咳嗽咳痰超過3周,,,,檢查對象,胸部X線異常,,凡因結核病癥狀求診及轉(zhuǎn)診的可疑肺

4、結核患者，均應進行痰直接涂片檢查,確定診斷的涂片檢查應采集3個合格的痰標本就診當時在門診留一份“即時痰”標本，同時給患者2個痰盒，囑患者留取“夜間痰”和“晨痰”，于次日交驗,檢查對象,檢查對象,治療中或復診隨訪病人按期每次送檢兩份痰(當 日即時痰、當日或次日晨痰） 初治涂陽患者在療程滿2、5、6月時 復治涂陽患者在療程滿2、5、8月時,,,,,經(jīng)萋爾-尼爾遜染色后在顯微鏡內(nèi)藍色

5、背景下呈紅色桿狀,寬度為0.3～0.6um，生長發(fā)育期間形成分枝,光學顯微鏡下為細長稍彎曲，兩端鈍圓的桿菌 ，菌體長度多為1.5~3.5um,結核菌的形態(tài)和結構,結核分枝桿菌,,,,,細胞質(zhì),核物質(zhì),細胞壁,細胞膜,結核分枝桿菌,結核菌的形態(tài)和結構,電子顯微鏡下的結核分枝桿菌,結核菌的形態(tài)和結構,結核桿菌用革蘭氏染色，著色較差但呈蘭色， 列為G＋菌 結核桿菌用普通的染色方法不易著色，在染液

6、 中加入石炭酸后才可著色,1,2,結核菌的形態(tài)和結構,抗酸染色時，因結核桿菌菌體含有大量脂質(zhì)，其脂質(zhì)的含量占分枝桿菌之首，占菌體干重的40%，因脂質(zhì)的含量大，所以不易著色，但經(jīng)過加熱或者提高石炭酸的濃度、延長染色時間等處理以后才能著色,3,結核菌的形態(tài)和結構,一旦著色，不易被鹽酸酒精脫色，而其他細菌均被脫色，把不被鹽酸酒精脫色的細菌稱為抗酸菌，這種方法稱為抗酸染色法,4,結核菌的形態(tài)和結構,,,,結核菌的形態(tài)和結構,【胸腹水】【腦

7、脊液】【尿標本】【膿液、病灶組織】【痰標本，肺部深咳的痰】,痰涂片操作程序,【胸腹水的采取】于試管中加20%的枸櫞酸鈉3—5滴，或10%的草酸鉀 5—6滴，可防止15—20ml 胸腹水凝固。無菌采取胸腹 水以后應立即送檢。可采取離心集菌或漂浮集菌法檢查,痰涂片操作程序,【纖維支氣管鏡刷檢物】可將毛刷直接進行抗酸染色,也可將刷檢標本洗脫于裝有無菌生理鹽水的試管中,再涂片檢查,痰涂片操作程序,【腦脊液的采取】無菌

8、手術取得腦脊液以后，3000轉(zhuǎn)離心30分鐘，取沉淀物涂片染色檢查結核性的腦脊液放在冰箱中4℃過夜以后，會在液面形成一個倒漏斗狀的薄膜，取此薄膜涂片染色鏡檢,痰涂片操作程序,【尿標本的采取】通常留取清晨第一次全尿或中后段夜尿,也可留取24小時的尿液，放冰箱或陰涼處，靜置，去上清，留沉淀部分50—60ml送檢，取此沉淀液，經(jīng)3000轉(zhuǎn)，離心30分鐘，取沉淀部分2ml直接涂片，染色檢查,痰涂片操作程序,膿液直接涂片染色鏡檢病灶組織或干酪

9、樣組織需充分研碎后再涂片檢查,痰涂片操作程序,當前,貴州省疾病預防控制機構結核病實驗室進行痰檢 工作的耗材由項目統(tǒng)一提供： 螺旋蓋痰瓶 可密封的塑料盒 可密封的蠟紙盒,,,痰涂片操作程序,痰涂片操作程序,痰涂片操作程序,痰涂片操作程序,,痰標本的采集,痰容器應標明病人姓 名、編號（檢查項目 和容器序號1、2、3 （1＝當日即時

10、痰，2 ＝夜間痰，3＝次日 晨痰）,通用螺旋蓋 痰瓶，或可 密封塑料盒 蠟紙盒收集 痰標本,,,如：張三，涂片 58—1，58—2 58--3,,痰涂片操作程序,,痰瓶上標明病人姓名，初診門診序號（或隨訪病人登記號）,痰標本留取后，痰盒切勿倒置、嚴防痰液外溢，應立即送檢,進行細菌學檢查時，應在登記本和檢驗報告單上注明標本性狀,留取標本,痰涂片操作程序,留痰時應囑咐病人盡量

11、深咳，留取痰量3~5毫升干酪痰、血痰、黏液痰為合格的標本唾液屬不合 格痰標本,難以獲得合格標本時，也應進行細菌學檢查，但 應注明標本性狀，以供分析結果時參考需送上一級實驗室檢查的痰標本應置4℃冰箱保存， 外送前認真核對檢驗單與痰瓶上標注，放專用的冰 盒內(nèi)運送，或用紙袋、塑料袋封裝扎牢后順序放入 包裝盒，盒外注明請勿倒置標志,痰涂片操作程序,合格的痰標本應是患者深呼吸后，由肺部深處咳出的分泌物,

12、痰涂片操作程序,【干酪痰】標本外觀以黃色(或奶酪色)、膿樣、團塊狀的肺部 分泌物為主，粘度較粘液痰低，制片時較易涂抹涂片染色后鏡檢，可發(fā)現(xiàn)大量膿性炎癥細胞、肺上 皮脫落細胞由于此類標本是由肺部深處咳出，對肺結核的診斷 最有價值，故抗酸桿菌(以下簡稱AFB)的檢出率較高,痰涂片操作程序,【血痰】此類標本是因粘液痰或干酪痰標本中混有血液而形成 顏色為褐色或深褐色、鮮紅色或伴有血絲涂片染色后鏡檢除能

13、夠觀察到粘液痰或干酪痰的細胞 特征外，含新鮮血液的標本中可見到被染色的血細胞由于含血標本易干擾AFB鏡檢的結果，故在制片時應盡 量避免挑取含血標本,痰涂片操作程序,痰涂片操作程序,【粘液痰】標本外觀以白色、粘稠度較高的肺部和支 氣管分泌物為主，制片時需仔細涂抹此類標本的AFB檢出率較唾液高,痰涂片操作程序,【粘液痰】涂片染色后鏡檢時，鏡下可見支氣管內(nèi)膜纖毛柱狀上皮細胞 (細胞較長且形態(tài)不規(guī)則、細胞核

14、和細胞質(zhì)著色均較深，細胞 一端可見著色較淺的纖毛)，伴有少量肺上皮脫落細胞(多數(shù) 為圓形、細胞核較小且著色較細胞質(zhì)深，核質(zhì)比大于 1:3)、 膿性炎癥細胞(卵圓形、細胞核占細胞比例較大且著色較 深，核質(zhì)比低于 1:1)、口腔脫落細胞及口腔寄生菌,【唾液】目視觀察標本整體外觀，以透明或半透明水樣、粘度 較低的口腔分泌物為主，標本中有時伴有氣泡涂片染色鏡檢時，鏡下可見少量口腔上皮脫落細胞(形

15、 態(tài)不規(guī)則、細胞核著色較細胞質(zhì)深，核質(zhì)比接近或大 于 1:2)和口腔內(nèi)寄生菌，有時可見食物殘渣由于此類標本進行AFB檢查時的檢出率很低，用于對患 者確定診斷時是不合格的標本,痰涂片操作程序,,痰涂片操作程序,細胞核質(zhì)比，白細胞，說明痰的質(zhì)量較好,痰涂片操作程序,上皮細胞多，說明標本質(zhì)量差,痰涂片操作程序,【清潔無劃痕的新玻片脫脂、干燥】 編號無磨砂面的玻片，需用玻璃刻刀或用標簽紙有磨砂面的玻片，可用鉛筆編號,,

16、痰涂片操作程序,,【清潔無劃痕的新玻片脫脂、干燥】使用折斷的竹簽茬端，取痰標本中干酪樣或膿樣 0.05~0.1毫升，涂于玻片右2/3處，均勻涂抹 10x20毫米大小的橢圓形痰膜痰膜朝上，待自然干燥(一般20分鐘),,痰涂片操作程序,10×20mm,,,,,,,,,,20mm,10mm,痰涂片操作程序,,,,復染 (亞甲蘭),脫色 (鹽酸酒精),初染 (堿性復紅),染色過程,痰涂片操作程序,【初染】將玻

17、片放置染色架上，玻片間距保持10毫米以上距離火焰固定（5秒鐘將玻片過火4次）滴加石炭酸復紅染液，蓋滿玻片火焰加熱至出現(xiàn)蒸汽，勿使沸騰脫離火焰，保持5分鐘,痰涂片操作程序,痰涂片操作程序,【脫色】流水自玻片一端清 緩沖洗染色液，瀝 去玻片上的水，滴 加脫色液，保持1 分鐘,痰涂片操作程序,【復染】滴加亞甲藍復染 液，保持30秒鐘流水沖洗，瀝去 玻片上的水玻片干燥后鏡檢,,將涂片排放在染

18、色架上，注意間隔,痰涂片操作程序,滴加堿性復紅,痰涂片操作程序,加熱,痰涂片操作程序,流水沖洗,痰涂片操作程序,脫色,痰涂片操作程序,流水輕緩沖洗,痰涂片操作程序,復染,痰涂片操作程序,流水洗去復染液,痰涂片操作程序,在玻片架上自然干燥,痰涂片操作程序,滴加亞甲蘭復染液保持1分鐘,1,2,3,4,5,6,7,將涂片排放在染色架上,滴加堿性復紅染色液加熱出現(xiàn)蒸汽后，保持5分鐘,流水輕緩沖洗,滴加脫色液，保持1分鐘,流水輕緩沖洗,流水輕緩