轉抗菌肽基因泡桐微生態(tài)安全研究.pdf

1、該論文主要進行了轉基因泡桐的微生態(tài)安全研究,為轉基因泡制的田間釋放提供實驗依據(jù),主要由方法的建立和應用方法進行系統(tǒng)研究兩部分組成.在方法學上的研究主要獲得了以下結果:首先建立了一種高效直接提取土壤DNA進行PCR方法.設計、比較了5種直接從土壤中提取DNA的方法,實驗結果表明這5種方法都可以從土壤中提取到長度大于15Kb的DNA片段,但在不同方法間DNA的產(chǎn)量存在很大差異;粗提的土壤DNA經(jīng)進一步提純后均可用于PCR反應,利用細菌16S

2、 rRNA基因和抗菌肽Shiva-1基因的引物都得到了相應的目的產(chǎn)物.其中方法5提取DNA產(chǎn)量最高,無明顯降解,且重復性好,是一種從小量土壤樣品中直接提取DNA的理論方法.其次應用PCR-DGGE分析細菌間親緣關系,以8個菌株為研究對象,通過分析細菌16S rRNA基因片段和rpoB基因片段的電泳圖譜可以確定細菌間的親緣關系,其結果與通過序列分析的相一致;這表明PCR-DGGE是一種非常有效而且簡單的細菌間親緣關系鑒定方法.轉抗菌肽基因

3、泡桐的微生態(tài)安全研究主要從轉抗菌肽基因泡桐對土壤中可培養(yǎng)細菌種菌種群影響及轉基因泡桐對根際細菌總種群影響等方面進行了研究.分離到轉基因泡桐及對照泡桐根際及根圍土壤中優(yōu)勢細菌種群,并對分離的細菌進行了鑒定;結果表明兩者在細菌組成上都是以芽孢桿菌和假單胞桿菌為主,其中芽孢桿菌又以巨大芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌為主,從細菌種群組成上沒有發(fā)現(xiàn)差異.此外進行了轉基因泡桐對蘇云金芽孢桿菌Bacillus thringiensis和苜蓿中華根瘤菌Sino

4、hizobium melilot影響的研究,結果表明:半年后,兩種供試菌在半年后兩種泡桐植株的根際土壤中的數(shù)量均有大幅的減少,但是轉基因植株和對照植株在減少的量上沒有顯著差異.以此同時,在一個周期內(nèi)分別提取武昌苗圃和許昌苗圃轉基因泡桐與對照泡桐根際土壤中的細菌總DNA,分別PCR擴增16S rRNA基因與rpoB基因片段,然后進行DGGE;通過比較在不同時期內(nèi)轉基因泡桐與對照泡桐的電泳圖中條帶差異尋找轉基因泡桐可能對細菌種群產(chǎn)生的影響.