桃體細胞胚發(fā)生相關基因SERK2的克隆與表達分析.pdf

1、桃樹是中國重要的落葉果樹之一，傳統(tǒng)桃的育種工作由于受工作量大、周期長等因素影響，從而導致育種工作進程緩慢?，F(xiàn)代分子生物技術的快速發(fā)展，尤其是植物組織培養(yǎng)和基因工程的發(fā)展，為桃定向改良和新品種選育提供了重要的技術支持。體細胞胚發(fā)生在植物再生中是一條重要途徑，而且它也是研究植物胚胎發(fā)育和遺傳轉化的良好受體。研究者們通過分析植物體細胞胚發(fā)生過程中的基因表達或在胚性組織和非胚性組織中基因的差異表達，獲得了在體細胞胚發(fā)生過程不同時期表達的基因，并

2、分析了這些基因在胚胎發(fā)生途徑中可能的作用?；诖?，本研究從‘秋甜’桃中分離得到SERK2基因CDS序列，研究SERK2基因在桃不同組織和器官中及在不同狀態(tài)愈傷組織中的表達情況，分析SERK2基因的表達與體胚發(fā)生能力等的關系;構建PpeSERK2基因超量表達載體并轉化擬南芥進行驗證基因功能。主要研究結果如下:
　　(1)PpeSERK2基因克隆:利用RT-PCR方法，從‘秋甜’不同組織（器官）和胚培苗葉片的cDNA中克隆獲得了Ppe

3、SERK2基因。PpeSERK2基因CDS全長1881bp，編碼626個氨基酸。
　　(2)PpeSERK2基因在‘秋甜’桃不同器官表達分析:利用qRT-PCR檢測分析PpeSERK2基因在桃不同器官的表達量，結果顯示PpeSERK2在‘秋甜’須根、莖（莖尖、莖基）、葉（老葉、嫩葉）、果實和胚中均有表達。其中PpeSERK2在莖基和莖尖相對表達量最高、其次是嫩葉和果肉，胚、須根和老葉三者的表達較低，其中老葉表達量最低。
　　

4、(3)PpeSERK2基因在‘秋甜’不同狀態(tài)愈傷組織中的表達分析:結果顯示PpeSERK2在‘秋甜’白色愈傷組織的表達量最高，并且顯著高于在黃綠、黃白、褐化和綠色愈傷組織中的表達水平。此外，PpeSERK2基因在綠色和黃綠色的愈傷組織中幾乎不表達。
　　(4)超量載體構建及PpeSERK2基因功能驗證:成功構建了35S:.PpeSERK2過量表達載體，通過農(nóng)桿菌介導方法轉化擬南芥并預想獲得轉基因植株。后續(xù)PpeSERK2基因功能驗