精子發(fā)生相關(guān)基因的克隆及功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、哺乳動物的精子發(fā)生是一個極其復(fù)雜的過程.在曲精小管中的生精細胞經(jīng)過漫長的分化過程,最終生成精子.生精過程中發(fā)生了許多生物學(xué)的變化,如精原細胞的自我更新,精母細胞的減數(shù)分裂和精子細胞的變形.精子發(fā)生是成年睪丸的一項重要的功能,許多在睪丸中特異性和/或高度表達的基因參與完成這一過程.為了尋找與精子發(fā)生相關(guān)的基因,我們采用了兩種策略：1.差異顯示PCR 分離曲精小管中的DNA含量為2n和4n的細胞群,比較兩群細胞的基因表達差異,獲取在4n細胞

2、中特異表達的表達序列標(biāo)簽（expressed sequence tags ESTs）.2.人睪丸cDNA微陣列雜交 從人睪丸文庫中PCR擴增插入片段,將PCR產(chǎn)物點膜制備成cDNA微陣列,然后提取胚胎和成人睪丸的mRNA,制備成探針,分別與微陣列進行雜交,獲取差異表達克隆.我們通過DD-RTPCR和cDNA微陣列差異雜交兩種策略從人睪丸中克隆出四個與精子發(fā)生相關(guān)的基因.這兩種方法各有優(yōu)缺點,DD-RTPCR方法適合小規(guī)模的實驗和小型實驗

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