蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、氨基甲酸酯類農(nóng)藥因其品種多、藥效好、對(duì)人畜低毒、高效、選擇性強(qiáng)等特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中。隨之帶來(lái)的農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量超標(biāo)問題也日益突出，直接影響著消費(fèi)者的身體健康和對(duì)外經(jīng)貿(mào)的發(fā)展。所以建立快速、高效、經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)方法成為亟待解決的問題。本文研究了目前最常用的兩種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法-酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA法）和酶抑制電化學(xué)法。首先以克百威的堿解產(chǎn)物呋喃酚為原料，采用一種新的半抗原合成途徑合成了克百威半抗原：2，3

2、-二氫-2，2-二甲基-7-苯并呋喃基對(duì)硝基苯氯甲酸酯（BFNH）。將半抗原與牛血清蛋白（BSA）偶聯(lián)制備了人工抗原BFNH-BSA，用所制備的人工抗原免疫動(dòng)物，從血清中分離純化獲得了高效價(jià)、高特異性的克百威多克隆抗體。純化后的抗體效價(jià)達(dá)到1.024×107，與5種結(jié)構(gòu)相似的氨基甲酸酯類農(nóng)藥和3種有機(jī)磷農(nóng)藥的交叉反應(yīng)率均低于9％。利用這種多克隆抗體建立了克百威ELISA檢測(cè)技術(shù)并對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化選擇。最低檢測(cè)限達(dá)10-7mg·mL-

3、1，優(yōu)化條件為：碳酸鹽緩沖液為較優(yōu)的包被介質(zhì)；20min為最佳反應(yīng)時(shí)間：甲醇含量10％以下，對(duì)免疫反應(yīng)的影響較小。兩種快速檢測(cè)方法對(duì)同一批出口蔬菜樣品的檢測(cè)結(jié)果對(duì)比分析顯示兩種方法檢測(cè)結(jié)果基本吻合：ELISA法檢出克百威殘留量超過(guò)0.5mg·kg-1的樣品有10例，檢出率5％；酶抑制電化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果中對(duì)乙酰膽堿酯酶抑制率超過(guò)60％的樣品有7例，檢出率3.5％。HPLC法驗(yàn)證結(jié)果與兩種快速檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果也基本符合，表明兩種快速檢測(cè)方法

4、的檢測(cè)結(jié)果較為準(zhǔn)確。ELISA法和酶抑制電化學(xué)法均適合對(duì)大量農(nóng)產(chǎn)品中有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留超標(biāo)與否進(jìn)行快速篩查，但在實(shí)際應(yīng)用中又各有其優(yōu)缺點(diǎn)，若兩種方法聯(lián)合應(yīng)用則可形成優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，極大地?cái)U(kuò)大農(nóng)藥殘留的檢測(cè)范圍。ELISA法非常適合大批量樣品的篩選，而且靈敏度、回收率都能滿足檢測(cè)要求，對(duì)于較易制得抗體的農(nóng)藥殘留檢測(cè)非常適用；對(duì)于較難得到抗體的農(nóng)藥殘留檢測(cè)，可用酶抑制電化學(xué)法替代，由本研究結(jié)果可知，酶抑制電化學(xué)法檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度與E