血清學(xué)診斷肝纖維化新指標(biāo)—TIMP-1試劑盒的研制、優(yōu)化及臨床應(yīng)用.pdf

1、本研究是繼導(dǎo)師聶青和教授1998年完成的中國(guó)博士后科學(xué)基金資助項(xiàng)目《病毒性肝纖維化基因治療的實(shí)驗(yàn)研究》課題的基礎(chǔ)上進(jìn)行的進(jìn)一步試驗(yàn)研究，以TIMP-1為研究的切入點(diǎn)，又進(jìn)行了如下科研工作： 1、TIMP-1ELISA檢測(cè)方法的建立及臨床初步應(yīng)用用抗人TIMP-1單克隆抗體(mAb)為包被抗體，加入待測(cè)抗原以及辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗TIMP-1mAb作為標(biāo)記抗體，經(jīng)以方陣滴定確定包被抗體、酶標(biāo)抗體及血清稀釋倍數(shù)的最適使用

2、濃度，建立了TIMP-1雙抗體夾心ELISA方法，并用于臨床初步檢測(cè)408例肝病患者血清。本法具有較高的敏感性、特異性和快速性，重復(fù)性及穩(wěn)定性好，試劑用量少，且不需復(fù)雜的儀器設(shè)備，加之實(shí)驗(yàn)程序簡(jiǎn)單，結(jié)果可靠，甚適于醫(yī)院及基層醫(yī)療單位臨床應(yīng)用。臨床應(yīng)用表明肝硬化檢出陽(yáng)性率為76.4％，明顯高于慢性肝炎(40.2％)和急性肝炎(19.5％)，并隨著病損纖維化程度加重而升高。為國(guó)內(nèi)TIMPs診斷試劑盒的研制和開發(fā)提供了科學(xué)依據(jù)。 2、

3、肝病患者血清中TIMP-1與HA、PCⅢ、CⅣ、LN水平的相關(guān)性研究由于血清透明質(zhì)酸(HA)、Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、Ⅳ型膠原(CⅣ)及層粘蛋白(LN)四項(xiàng)肝纖維化指標(biāo)在病例選擇、檢測(cè)方法、試劑等方面的差異，以及受到肝臟炎癥活動(dòng)的影響，給臨床上正確評(píng)估肝纖維化的程度及消長(zhǎng)帶來(lái)一定的困難。本研究對(duì)425例肝病患者和110例正常對(duì)照者采用ELISA測(cè)定血清TIMP-1、放射免疫分析法測(cè)定HA、PCⅢ、CⅣ和LN和全自動(dòng)酶法測(cè)定血清總膽汁酸(T

4、BA)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)。了解肝病患者血清中TIMP-1與HA、PCⅢ、CⅣ和LN的相互關(guān)系及臨床意義。結(jié)果顯示血清TIMP-1與HA、PCⅢ、CⅣ和LN呈顯著正相關(guān)，與TBA、ALT呈正相關(guān)，并隨肝臟病損纖維化程度加重而檢出陽(yáng)性率逐漸增高，可作為診斷肝纖維化更為可靠、有效的指標(biāo)。 3、TIMP-1ELISA檢測(cè)方法條件的優(yōu)化研究用抗人TIMP-1單克隆抗體，HRP標(biāo)記的抗TIMP-1，通過(guò)選用國(guó)產(chǎn)酶聯(lián)板及對(duì)酶聯(lián)板進(jìn)行