內皮祖細胞移植對兔心肌梗死后心功能的影響.pdf

1、研究背景:心肌梗死或其他器質性心血管疾病的終末期均可導致心力衰竭,其中心肌細胞不可逆轉死亡或凋亡是心衰發(fā)病機制中最重要的始動和加速因素之一。傳統的治療方法如藥物、介入和外科手術均不能使缺失的心肌細胞再生。近年來的研究表明,內皮祖細胞(EPC)是一類可以直接分化為血管內皮細胞的前體細胞,能夠參與的血管生成及機體局部缺血組織的修復,這使得促進血管新生,改善心肌供血,從而提高心肌梗死后的心功能成為可能。基于此理論,本實驗分離兔骨髓血內皮祖細胞

2、,移植到心肌局部缺血損傷處,觀察其對兔心肌梗死后心功能和血漿腦鈉肽的影響。
　　研究目的:探討內皮祖細胞移植對兔心肌梗死后心功能及血漿腦鈉肽影響。
　　實驗方法:
　　第一部分兔骨髓EPC的培養(yǎng)和鑒定和BrdU標記
　　1.無菌條件下抽取兔股骨骨髓,以密度梯度離心法分離出單核細胞,在EBM-2培養(yǎng)液中培養(yǎng)、觀察。
　　2.采用Flk-1和AC133免疫熒光雙染法,鑒定細胞表型。
　　第二部分1.選取大

3、耳白兔60只,采用結扎左冠狀動脈前降支的方法制作心肌梗死模型。
　　2.隨機分為3組,實驗組大耳白兔注射含EPC的PBS液,對照組大耳白兔心肌內注射等量PBS液,第三組為假手術組,三組均給予口服阿司匹林、氯吡格雷、單硝酸異酸梨酯、阿托伐他汀鈣、血管緊張素轉換酶抑制劑和β腎上腺素能阻滯劑等(劑量按標準體重給予)。
　　3.術后4 w,行超聲心動圖檢查、新生血管密度測定和血漿腦鈉肽濃度的測定。
　　實驗結果:1.剛分離的細

4、胞呈圓形,接種后24 h部分細胞貼壁,5d后細胞呈三角形,偶有集落出現;8d后細胞呈長梭形及多角形,有類似集落樣分布,細胞分布不均勻。傳代后,細胞分布較均勻,大部分呈短梭形,有集落樣結構出現。
　　2.7d的EPC經AC133與flk-1雙染后,激光掃描共聚焦顯微鏡觀察顯示細胞呈flk-1強陽性(綠色熒光),AC133有弱陽性表達(紅色熒光),而以PBS代替一抗的陰性對照熒光顯微鏡下無明顯顯色,CD133和Flk-1雙染雙陽性(黃

5、色熒光),證明實驗所得細胞為正在分化的EPC。
　　3.實驗組左室舒張末期內徑(LVEDd)與對照組相比,差異無統計學差異,而實驗組左室射血分數(LVEF)與對照組相比明顯升高,差異有統計學意義(P＜0.05)。
　　4.與對照組相比,實驗組新生毛細血管數升高,差異有統計學意義(P＜0.01)。
　　5.實驗組的血漿BNP水平與對照組相比明顯降低,差異有統計學意義(P＜0.05)。
　　實驗結論:1.通過體外分離