冠心病患者外周血MMP-9的變化及阿托伐他汀對(duì)大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖、MMP-9活性的影響.pdf

1、研究背景隨著人民生活水平的提高，冠心病(coronaryheartdiseaseCHD)已成為嚴(yán)重危害人民健康和導(dǎo)致死亡的主要疾病，動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosisAS)是導(dǎo)致冠心病的主要原因，因此預(yù)防、早期發(fā)現(xiàn)、治療甚至逆轉(zhuǎn)動(dòng)脈粥樣硬化是治療冠心病的主要方向。動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生過程中的一個(gè)主要特征是血管壁中層平滑肌細(xì)胞(vascularsmoothmusclecellVSMC)穿過內(nèi)彈力層遷移至內(nèi)膜繼而在內(nèi)膜增殖，VSMC遷

2、移和增殖的機(jī)制目前尚未明確。經(jīng)皮冠脈介入治療(percutaneouscoronaryinterventionPCI)術(shù)后再狹窄(restenosisRS)是CHD介入治療的主要并發(fā)癥，而VSMC的遷移和增殖又被認(rèn)為是再狹窄形成過程中最具特征的細(xì)胞生物學(xué)事件之一。近年發(fā)現(xiàn)VSMC遷移和增殖在造成VSMC數(shù)量和分布發(fā)生變化的同時(shí)，還大量分泌與合成細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrixECM)和基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmet

3、aloproteinasesMMPs)，后者通過降解ECM一方面促進(jìn)VSMC遷移和增殖，另一方面降解動(dòng)脈粥樣硬化斑塊纖維帽成分而導(dǎo)致斑塊破裂，引發(fā)ACS。 為進(jìn)一步觀察他汀類藥物對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖、合成分泌MMP-9及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的影響。我們以MMP-9與頸動(dòng)脈超聲表現(xiàn)為觀察對(duì)象，以阿托伐他汀為干預(yù)因素，研究冠心病患者外周血MMP-9水平的變化及阿托伐他汀對(duì)大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖、MMP-9活性的作用及長期服用他汀對(duì)老年

4、冠心病患者頸動(dòng)脈斑塊的影響。 第一部分冠心病患者外周血MMP-9、CRP的變化及其臨床意義目的：觀察不同類型冠心病患者外周血MMP-9及CRP的水平變化，探討MMP-9、CRP與冠心病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。方法：選取我科2004年7月-2005年4月入院診斷為冠心病且入院后行冠狀動(dòng)脈造影術(shù)的患者73名，其中最后診斷AMI22例、UA17例；SA17例；對(duì)照者17例。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定血漿MMP-9的水平，CRP由檢驗(yàn)科

5、用免疫散射比濁法檢測(cè)。結(jié)果：1、AMI組、UA組與SA組患者血漿MMP-9水平均顯著高于對(duì)照組(p＜0.01，p＜0.01，p＜0.05)。2、AMI組、UA組患者血漿CRP水平均顯著高于對(duì)照組(p＜0.01，p＜0.01)，而SA組與對(duì)照組無顯著性差異。3、AMI組、UA組患者血漿MMP-9水平均顯著高于SA組(p＜0.01，p＜0.01)。4、AMI組患者M(jìn)MP-9、CRP水平與UA組比較均有顯著性差異(p＜0.01，p＜0.01)

6、。5、ACS患者中MMP-9和CRP水平無明顯相關(guān)性。結(jié)論：冠心病患者M(jìn)MP-9、CRP水平升高。ACS患者M(jìn)MP-9、CRP水平升高可能提示斑塊不穩(wěn)定。ACS患者血清MMP-9和CRP水平無明顯相關(guān)性，提示二者可能通過不同的方面反映了斑塊的不穩(wěn)定性。聯(lián)合檢測(cè)血清MMP-9及CRP水平，對(duì)冠心病患者進(jìn)行篩選分層，應(yīng)能更有效的預(yù)測(cè)急性冠脈事件的發(fā)生。 第二部分高脂血清對(duì)SD大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖、MMP-9活性的影響及阿托伐他汀

7、干預(yù)的結(jié)果目的：觀察不同高脂血清及阿托伐他汀對(duì)大鼠主動(dòng)脈SMCs增殖及MMP-9活性的影響。方法：以組織塊法培養(yǎng)的SD大鼠主動(dòng)脈SMCs為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，取第5～15代SMCs用于實(shí)驗(yàn)。分別給予不同質(zhì)人血清及阿托伐他汀進(jìn)行干預(yù)。采用MTT比色法測(cè)定細(xì)胞數(shù)目，以酶譜分析法測(cè)定明膠酶MMP-9活性。結(jié)果：(1)在10-7～10-4mol/L阿托伐他汀作用下培養(yǎng)48h后，SMC的MTTA490值分別為0.445±0.020、0.416±0.007、

8、0.408±0.021、0.383±0.012均明顯低于對(duì)照組0.484±0.034(p＜0.05)；(2)10-4mol/L阿托伐他汀作用12h、24h、36h、48h、72h后，MTTA490值分別為0.497±0.006、0.477±0.012、0.417±0.016、0.384±0.018、0.378±0.009。與12h組相比，36h、48h、72h組A490值均顯著降低(p＜0.01)；與24h組相比，36h、48h、72h

9、組A490值均顯著降低(p＜0.01)；(3)胎牛血清組、正常血清組、高膽固醇血清組、高甘油三酯血清組、高膽固醇并高甘油三酯血清組干預(yù)48h后，MTTA490值分別為0.484±0.034、0.486±0.012、0.535±0.014、0.498±0.030、0.573±0.004，其中高膽固醇血清組與正常血清組相比，明顯促進(jìn)SMC增殖(p＜0.01)；高膽固醇并高甘油三酯血清組與前4組相比，均明顯促進(jìn)SMC增殖(p＜0.05)；(4

10、)上述各不同質(zhì)血清組加入阿托伐他汀干預(yù)后，MTTA490值分別為0.383±0.012、0.384±0.018、0.411±0.013、0.384±0.008、0.432±0.006。與各自對(duì)應(yīng)的血清組比較，均明顯抑制SMC增殖(p＜0.01)；(5)10-7、10-6、10-5、10-4mol/L阿托伐他汀作用48小時(shí)，MMP-9降解明膠的面積分別為0.226±0.006、0.213±0.006、0.152±0.022、0.156±0

11、.027mm2。其中10-5、10-4mol/L組均較對(duì)照組(0.242±0.015)顯著增高，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)，10-7、10-6mol/L組與對(duì)照組比較，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.294，p=0.067)；(6)10-4mol/L阿托伐他汀作用12h、24h、36h、48h、72h后，MMP-9降解明膠的面積分別為0.079±0.012、0.084±0.005、0.136±0.023、0.156±0.007、0

12、.154±0.003mm2。其中24h、48h、72h組均較相應(yīng)時(shí)間對(duì)照組明顯減小，24h組與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，48h、72h組與對(duì)照組比較，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)；(7)胎牛血清、正常血清、高膽固醇血清、高甘油三酯血清、高膽固醇并高甘油三酯血清組等不同質(zhì)血清干預(yù)48h后，正常血清組、高膽固醇血清組、高甘油三酯血清組及高膽固醇并高甘油三酯血清組MMP-9降解明膠的面積與胎牛血清組相比，均有顯著性差異(

13、p＜0.01)。高膽固醇血清組、高甘油三酯血清組及高膽固醇并高甘油三酯血清組MMP-9降解明膠的面積與正常血清組相比，均有顯著性差異(p＜0.01)。高膽固醇血清組、高甘油三酯血清組及高膽固醇并高甘油三酯血清組之間兩兩比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (8)各不同質(zhì)血清組相應(yīng)他汀組干預(yù)48h后，其中胎牛血清他汀組與胎牛血清組相比明顯抑制MMP-9的活性(p＜0.01)，正常血清他汀組與正常血清組相比也抑制MMP-9的活性(p＜0.05

14、)，高膽固醇血清組、高甘油三酯血清組及高膽固醇并高甘油三酯血清組加不加他汀沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.768、0.918、0.751)。 結(jié)論：(1)阿托伐他汀可顯著抑制SD大鼠主動(dòng)脈SMCs增殖與MMP-9活性，呈濃度和時(shí)間依賴性；(2)高膽固醇血清及高膽固醇并高甘油三酯血清促進(jìn)SD大鼠主動(dòng)脈SMCs增殖；(3)阿托伐他汀可顯著抑制高脂血清對(duì)SD大鼠主動(dòng)脈SMCs增殖作用；(4)高脂血清能夠誘導(dǎo)SD大鼠主動(dòng)脈SMCs明膠酶活性增強(qiáng)

15、；(5)阿托伐他汀未能抑制高脂血清誘導(dǎo)的SD大鼠主動(dòng)脈SMCs明膠酶活性增強(qiáng)。 第三部分長期應(yīng)用阿托伐他汀對(duì)冠心病患者頸動(dòng)脈粥樣斑塊的影響目的：觀察長期應(yīng)用阿托伐他汀對(duì)冠心病患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的影響。方法：經(jīng)冠脈造影證實(shí)為冠心病并經(jīng)超聲檢查頸動(dòng)脈有不同程度斑塊者44例，男性28例，女性16例，年齡60.9±9.9歲，給予阿托伐他汀10mg，口服，每晚一次，共2年。每6個(gè)月檢測(cè)一次患者血脂水平，同時(shí)用彩色多普勒超聲觀察患者頸動(dòng)

16、脈系統(tǒng)內(nèi)徑、內(nèi)-中膜厚度、斑塊大小及血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的變化。結(jié)果：(1)治療6mo后，阿托伐他汀可以使TC、LDL-C水平降低，與治療前比較有顯著性差異(P＜0.001)；隨治療時(shí)間延長，TG水平逐漸降低；HDL-C水平漸升高，但直至治療18mo及24mo，才與治療前有顯著性差異。(2)與治療前相比，頸動(dòng)脈內(nèi)徑有所擴(kuò)大，內(nèi)-中膜厚度減小，頸動(dòng)脈斑塊縮小，血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)改善。結(jié)論：阿托伐他汀降脂療效確切，并有擴(kuò)大血管內(nèi)徑，減小內(nèi)-中膜厚度，

17、改善頸動(dòng)脈血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)的作用。長期服用阿托伐他汀對(duì)冠心病患者的頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊有消退作用。 全文結(jié)論：1冠心病患者M(jìn)MP-9、CRP水平升高，ACS患者M(jìn)MP-9、CRP水平明顯升高可能提示斑塊不穩(wěn)定。但ACS患者血清MMP-9值和CRP水平無明顯相關(guān)性。 2阿托伐他汀可顯著抑制SD大鼠主動(dòng)脈SMCs增殖與MMP-9活性，呈濃度和時(shí)間依賴性。 3高膽固醇血清促進(jìn)SD大鼠主動(dòng)脈SMCs增殖，阿托伐他汀可顯著抑制