碳青霉烯類抗生素體外誘導(dǎo)銅綠假單胞菌耐藥的分子機制研究.pdf

1、目的： 1．研究美羅培南及亞胺培南在體外對銅綠假單胞菌的耐藥誘導(dǎo)作用； 2．分析應(yīng)用泵抑制劑CCCP后對銅綠假單胞菌耐藥性的改變； 3．研究耐藥菌株與臨床分離敏感株外膜蛋白oprD2表達水平的差異； 4．測定銅綠假單胞菌耐藥基因決定區(qū)域。 方法： 1．用含藥瓊脂平板法，取臨床分離的對亞胺培南和美羅培南均敏感的銅綠假單胞菌15株，應(yīng)用不同濃度梯度亞胺培南和美羅培南逐級誘導(dǎo)，敏感株為對照組，篩

2、選耐藥菌； 2．在飽和濃度泵抑制劑作用下，測定銅綠假單胞菌對美羅培南及亞胺培南的最小抑菌濃度(MIC)值； 3．應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)、瓊脂糖電泳對oprD基因編碼區(qū)進行研究，了解是否存在缺失突變； 4．膜蛋白電泳觀察誘導(dǎo)前后oprD2蛋白表達水平的差異； 5．細菌oprD基因編碼區(qū)測序分析，對耐藥菌的耐藥基因決定區(qū)域進行研究； 6．采用統(tǒng)計軟件SPSS14.0的T Test比較外膜蛋白oprD2表達的

3、差異。 結(jié)果： 1．體外亞胺培南和美洛培南梯度誘導(dǎo)共產(chǎn)生30株高度耐藥菌株，MIC最低都達到256μg/ml(64×MIC)； 2．42％的耐藥菌株在應(yīng)用外排泵抑制后對抗菌藥物MIC下降； 3．在SDS-PAGE圖譜上亞胺培南與美洛培南耐藥組與同源敏感株相比均有外膜蛋白的減少； 4．測序結(jié)果顯示oprD基因編碼區(qū)存在點突變。 結(jié)論： 1．亞胺培南和美洛培南在體外以亞抑菌濃度誘導(dǎo)可產(chǎn)