銅綠假單胞菌耐藥性分析及碳青霉烯類耐藥銅綠假單胞菌外排泵MexAB-OprM的相關研究.pdf

1、目的：
　　1.了解臨床分離的銅綠假單胞菌的分布情況以及其對臨床常用抗菌藥物的耐藥性,為臨床醫(yī)生抗感染治療提供依據(jù),指導臨床醫(yī)生合理使用抗菌藥物。
　　2.了解外排泵MexAB-OprM在耐碳青霉烯類銅綠假單胞菌中所起的作用。
　　3.研究外排泵MexAB-OprM表型陽性菌株中外排泵調控基因mexR、nalC及nalD的突變情況。
　　方法：
　　采用紙片擴散法（K-B法)檢測臨床分離的459株銅綠假單胞

2、菌(P.aeruginosa)對13種抗菌藥物的敏感性;瓊脂稀釋法檢測75株碳青霉烯類耐藥 P.aeruginosa亞胺培南及美羅培南的最低抑菌濃度(MIC),并聯(lián)合外排泵抑制劑(MC207110)進行外排泵表型的篩選,PCR擴增外排泵表現(xiàn)陽性的13株銅綠假單胞菌的外排泵基因 mexB,并擴增 mexB陽性菌株的外排泵MexAB-OprM的調控基因mexR、nalC及nalD,所得PCR產物進行測序并比對。熒光定量聚合酶鏈式反應(Rea

3、l-time PCR)檢測外排泵表型篩選陽性的13株菌外排泵基因mexA mRNA的表達水平。
　　結果：
　　459株P.aeruginosa的藥敏結果顯示:氨曲南的耐藥率為82.3％,阿米卡星的耐藥率為15.2%,亞胺培南和美羅培南的耐藥率分別為23.4%和22.6%,頭孢他啶、頭孢哌酮以及哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率相對較高,為36.6%~37.6%之間。添加外排泵抑制劑MC207110后對亞胺培南和美羅培南的作用結果顯

4、示:75株碳青霉烯類耐藥P.aeruginosa,有13(17.3%)株對亞胺培南和(或)美羅培南的MIC下降4倍及4倍以上,重新編號為PA1至PA13。13株外排泵表型陽性菌株10株菌mexB表達陽性,10株菌的外排泵調控基因mexR、nalC及nalD均陽性,共有9株菌NalC均發(fā)生第71位氨基酸突變:甘氨酸(Gly)→谷氨酸(Glu)、其中8株菌同時還發(fā)生第209位氨基酸突變:絲氨酸(Ser)→精氨酸(Arg),僅發(fā)現(xiàn)1株菌Nal

5、D第158位氨基酸突變:蘇氨酸(Thr)→異亮氨酸(Ile)、8株菌MexR發(fā)生突變。PA4、PA5及PA2此3株菌mexA的相對表達量最高,分別為10.26倍、8.83倍以及6.12倍,有6株菌mexA基因相對表達量小于2倍。
　　結論：
　　1.本研究中臨床分離的P.aeruginosa標本來源以痰標本(64.7%)最多,感染科室以呼吸內科分離率(17.4%)最高。
　　2.本研究中臨床分離的P.aeruginos

6、a對阿米卡星耐藥率最低,其次為頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢吡肟、美羅培南及亞胺培南等,臨床經驗性治療可選上述一種藥物或兩種藥物聯(lián)合治療。
　　3.外排泵MexAB-OprM高表達菌株均存在調控基因的突變。
　　4.外排泵MexAB-OprM的高表達在P.aeruginosa對碳青霉烯類耐藥中起到重要作用。
　　5.外排泵 MexAB-OprM的調控基因 mexR第54位氨基酸亮氨酸→脯氨酸(Leu→Pro)、第37位氨基酸脯