細(xì)胞外基質(zhì)蛋白Mindin在CMT93細(xì)胞中的抑癌作用.pdf

1、目的：探討細(xì)胞外基質(zhì)蛋白Mindin在小鼠大腸癌發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)功能及其相關(guān)的信號(hào)通路。
　　方法：本研究通過(guò)構(gòu)建Mindin基因的表達(dá)質(zhì)粒和Mindin-SiRNA表達(dá)載體，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染小鼠大腸癌細(xì)胞系CMT93，利用G418和嘌呤霉素篩選出干擾質(zhì)?；蛘哌^(guò)表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞株；利用半定量RT-PCR、Western-blot等方法檢測(cè)Mindin基因在mRNA和蛋白水平的表達(dá)變化情況。通過(guò) Transwell小室、MTT等技術(shù)方法分別

2、探討Mindin在CMT93細(xì)胞中對(duì)其遷移、侵襲和增殖方面的變化情況。同時(shí)構(gòu)建動(dòng)物模型，把干擾或過(guò)表達(dá)Mind in后的CMT93細(xì)胞注射在C57BL/6小鼠皮下，觀(guān)察其成瘤的生長(zhǎng)情況。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建了Mindin的表達(dá)質(zhì)粒和干擾質(zhì)粒；用 RT-PCR和Western-blot方法驗(yàn)證了Mindin干擾和過(guò)表達(dá)的細(xì)胞株中基因表達(dá)效果有差異，并具有顯著性的意義；Transwell小室和MTT法等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)大腸癌細(xì)胞CMT93在干

3、擾Mindin后，細(xì)胞的遷移和侵襲能力增強(qiáng)，增殖能力提高，而在Mindin過(guò)表達(dá)的細(xì)胞株中結(jié)果則相反，均表現(xiàn)為下降的趨勢(shì)。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，觀(guān)察小鼠皮下成瘤的生長(zhǎng)情況顯示，注射干擾Mindin細(xì)胞的瘤體較對(duì)照組更大，而注射過(guò)表達(dá)的細(xì)胞后瘤體更小。同時(shí)，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，干擾Mindin的細(xì)胞株中ERK1/2的磷酸化水平升高，反之，過(guò)表達(dá)者磷酸化水平則下降。
　　結(jié)論：Mindin在體內(nèi)外對(duì)小鼠大腸癌細(xì)胞CMT93的遷移、侵襲和增殖能力