MACC1在胰腺癌中的表達及其對增殖、遷移及耐藥等功能影響的實驗研究.pdf

1、1.研究背景及目的：
　　 胰腺癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，起病隱匿、早期診斷非常困難、發(fā)展十分迅速、預后較差，死亡率較高。胰腺癌是在遺傳因素和環(huán)境因素的共同作用下，經(jīng)過多階段復雜的生物學演變而形成的惡性疾病。大部分患者在其就診時已經(jīng)屬于晚期，手術切除率只有10％-20％，5年生存率不足5％。胰腺癌病人的預后與是否能夠早期診斷及治療方案選擇是否合理密切相關。因此，尋找能夠早期診斷胰腺癌的特異性分子指標，對胰腺癌的早期診斷和指導

2、治療具有重要意義。MACC1是一種在結腸癌中新發(fā)現(xiàn)的致癌基因，且與腫瘤轉移和病人預后高度相關。而MACC1在胰腺癌中的研究尚未見報道，故本課題對MACC1在胰腺癌中的表達情況及其在胰腺癌腫瘤增殖、遷移和耐藥中的作用進行了研究。
　　 2.研究方法：
　　 2.1、經(jīng)我院倫理委員會及病人同意，我們收集了自2010年1月到2011年12月60例胰腺癌病人血清及49例正常人血清。采用ELISA法測定這109例血清標本中MACC

3、1的蛋白表達量，并結合臨床資料進行統(tǒng)計分析。
　　 2.2、在基因水平和蛋白水平上檢測5株胰腺癌細胞系中MACC1的表達量，并驗證3種MACC1siRNA的干擾效果，確定效果最好的一對siRNA用于后續(xù)實驗。
　　 2.3、采用MTT試驗檢測干擾胰腺癌CFPAC-1細胞系中MACC1的表達對胰腺癌細胞增殖的影響。
　　 2.4、進行transwell遷移實驗，觀察MACC1對胰腺癌細胞系CFPAC-1遷移的影響，

4、并檢測EMT相關蛋白的表達變化。
　　 2.5、采用MTT試驗和流式細胞學技術，檢測干擾MACC1后胰腺癌細胞系CFPAC-1對吉西他濱化療耐藥的影響，并檢測凋亡相關蛋白的變化，并探討MACC1在胰腺癌遷移及化療耐藥過程中發(fā)揮生物學作用的機制。
　　 3.結果：
　　 3.1、通過ELISA法檢測，我們首次發(fā)現(xiàn)MACC1在腫瘤病人血清中也存在高表達情況。60例胰腺癌病人血清中，有38例呈陽性表達；而在49例正常人

5、血清中，只有2例存在陽性表達情況。在胰腺癌病人中，我們發(fā)現(xiàn)，MACC1高表達與胰腺癌病人淋巴結轉移、遠處轉移及TNM分期相關。
　　 3.2、MACC1在胰腺癌細胞系CFPAC-1中表達最高，BXPC-3細胞系表達較弱，AsPC-1、PANC-1和MIAPaCa-2等細胞系中，MACC1幾乎檢測不到表達。在3對siRNA引物中，第2對引物干擾效果最好。
　　 3.3、MTT試驗結果顯示，干擾掉MACC1后，對胰腺癌細胞系

6、CFPAC-1的增殖具有顯著的抑制作用。
　　 3.4、遷移試驗表明，干擾掉MACC1后，明顯降低了CFPAC-1細胞的遷移能力，且Westemblot方法發(fā)現(xiàn)這也引起了EMT相關蛋白E-cadherin的上調。
　　 3.5、流式檢測和MTT試驗同時顯示，干擾掉MACC1后，導致CFPAC-1細胞對吉西他濱更為敏感，相關抗凋亡蛋白Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9減少，且通路蛋白Ras和p-ERK1/2