FXYD3在人胰腺導(dǎo)管腺癌中的表達(dá)及對人胰腺癌細(xì)胞生長的影響.pdf

1、胰腺導(dǎo)管腺癌是一種具有高度侵襲行為的惡性腫瘤，目前的治療還是以手術(shù)為主，盡管結(jié)合了放療、化療等方法進(jìn)行綜合治療，但療效都不能令人滿意，5年存活率低于5％。胰腺癌的形成是一個(gè)由多基因參與、多步驟的復(fù)雜過程，過去根據(jù)已知基因有目的的進(jìn)行了一些研究，雖然發(fā)現(xiàn)部分基因與癌的發(fā)生、發(fā)展具有相關(guān)性，并且根據(jù)這些進(jìn)行了基因治療，但一直沒有很好的效果。近年發(fā)展起來的新技術(shù)如基因芯片、組織芯片和蛋白質(zhì)組學(xué)等，可以將更多的基因或蛋白質(zhì)表達(dá)改變與人類疾病直接

2、的聯(lián)系起來，為闡明疾病發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制和尋找新的治療靶點(diǎn)開拓了更廣闊的研究思路。 FXYD3就是在利用基因芯片技術(shù)對胰腺癌基因差異表達(dá)的研究中發(fā)現(xiàn)的，結(jié)果顯示它在胰腺癌中表達(dá)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于慢性胰腺炎及正常胰腺組織。FXYD3是FXYD家族成員之一，也是Na，K-ATP酶的組織特異性調(diào)節(jié)器。在正常組織中，F(xiàn)XYD3主要表達(dá)于子宮、胃、結(jié)腸和皮膚。此外，有研究發(fā)現(xiàn)它在人原發(fā)乳腺癌和人乳腺癌細(xì)胞系、直腸結(jié)腸癌細(xì)胞系和前列腺癌中也表達(dá)。FXY

3、D3不僅在某些癌中表達(dá)上調(diào)，而且部分表達(dá)與它們的分期相關(guān)。但目前為止，對FXYD3的正常生理功能及病理作用還不甚清楚。 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用熒光定量PCR、WesternBlot和免疫組化技術(shù)檢測了FXYD3在人胰腺癌導(dǎo)管腺癌細(xì)胞系及組織中的表達(dá)，探討了FXYD3作為胰腺癌治療靶基因的可能性。以FXYD3為靶基因，篩查了9株人胰腺癌細(xì)胞系的表達(dá)。通過RT-PCR方法，在FXYD3高表達(dá)的人胰腺癌細(xì)胞系中克隆出FXYD3cDNA，構(gòu)建FXY

4、D3重組質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)染至FXYD3表達(dá)陰性的人胰腺癌細(xì)胞系。通過檢測生長曲線、流式細(xì)胞術(shù)、熒光TUNEL系統(tǒng)及細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)等方法，初步評價(jià)FXYD3對胰腺癌的作用。 結(jié)果顯示FXYD3蛋白在人胰腺導(dǎo)管腺癌組織中的陽性表達(dá)率為86.5％，與慢性胰腺炎(40％)、癌旁組織(13.5％)及正常胰腺組織(10％)比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著差異(P＜0.01)。9株人胰腺癌細(xì)胞系中FXYD3在4株中有表達(dá)。9株胰腺癌細(xì)胞系的FXYD3兩個(gè)轉(zhuǎn)

5、錄子中，有4個(gè)突變點(diǎn)，其突變與細(xì)胞系的蛋白表達(dá)無關(guān)。將含有FXYD3cDNA的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入陰性表達(dá)的人胰腺癌細(xì)胞系(Panc-1)后：結(jié)果顯示FXYD3轉(zhuǎn)染組細(xì)胞生長較其它對照組快；處于S期的細(xì)胞數(shù)量比對照組顯著增高，同時(shí)其G1期細(xì)胞明顯減少；細(xì)胞凋亡率與對照組無顯著差別；在細(xì)胞聚集、遷移及體外侵襲能力方面，F(xiàn)XYD3轉(zhuǎn)染組與其它對照組細(xì)胞也無明顯差別。 本實(shí)驗(yàn)研究表明FXYD3蛋白在人胰腺導(dǎo)管腺癌中高表達(dá)。9株人胰腺癌細(xì)胞系中F