SM22α在TGFβ誘導的血管平滑肌細胞表型重塑中的作用.pdf

1、目的:血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)是非終末分化細胞,具有表型重塑的特性。SM22α(smooth muscle22 alpha,SM22α)是VSMC分化早期的標志基因之一,其表達具有平滑肌組織特異性和細胞表型特異性。本研究利用小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)技術敲低內源性SM22α表達,觀察對轉化生長因子β(transforminggrowt

2、h factor,TGFβ)誘導的VSMC細胞骨架組構、氧化應激以及分化相關轉錄因子Krüppel樣因子4(krüppel-like factor4,KLF4)活化的影響。
　　 方法:用貼塊法分離、培養(yǎng)大鼠VSMC,取3～5代細胞進行實驗;用免疫沉淀檢測KLF4的磷酸化水平;Western blot分析檢測TGFβ對SM22α和SMα-actin表達的影響;用免疫熒光染色顯示細胞內SM22α表達和定位;用DHE染色確定SM22

3、α在氧化應激中的作用。
　　 結果:
　　 1、TGFβ誘導血管平滑肌細胞表達SM22α
　　 用TGFβ(2 ng/ml)刺激VSMC不同時間,SM22α、SMα-actin的表達水平呈時間依賴性升高。表明TGFβ能誘導血管平滑肌細胞SM22α表達。
　　 2、SM22α抑制TGFβ誘導的分化轉錄調節(jié)因子KLF4磷酸化
　　 Western blot結果顯示,TGFβ處理的細胞,其KLF4的磷酸

4、化水平明顯升高。轉染SM22α特異的siRNA敲低內源性SM22α表達后,TGFβ誘導的KLF4磷酸化較對照組更加明顯。提示SM22α可抑制TGFβ誘導的KLF4磷酸化。
　　 3、SM22α介導TGFβ誘導的actin應力纖維的形成
　　 免疫熒光染色結果顯示,TGFβ處理的VSMC應力纖維致密、成束,SM22α熒光強度明顯增強,沿應力纖維分布;而敲低內源性SM22α,再給予TGFβ刺激,則細胞應力纖維稀疏,SM22α

5、熒光強度減弱,彌散分布于細胞漿中。提示SM22α參與了TGFβ誘導的應力纖維形成。
　　 4、SM22α抑制TGFβ誘導的氧化應激
　　 采用DHE熒光染色法觀察VSMC O2的生成。結果顯示,TGFβ刺激后,顯示O2-生成的紅色熒光強度增加;敲低內源性SM22α,再給予TGFβ刺激,可見細胞內紅色熒光強度更明顯。說明TGFβ可誘導VSMC產生氧化應激,而SM22α對該過程可能具有抑制作用。
　　 結論: