褪黑素通過調節(jié)膠質瘤細胞中microRNA-155的表達發(fā)揮抑癌作用的機制研究.pdf

1、目的：
　　檢測經褪黑素處理后的膠質瘤細胞株中microRNA-155(miR-155)的表達情況,探討褪黑素對膠質瘤細胞增殖、轉移和侵襲能力的影響,并探究其抑癌的相關機制。
　　方法：
　　第一部分:1、選用人腦膠質瘤細胞株 U87、U373、U251共三株,分別用不同濃度(100μM、1μM、1nM)的褪黑素處理。運用qRT-PCR技術檢測三株膠質瘤細胞中miR-155的表達量相對于對照組的變化。明確褪黑素和miR

2、-155表達量的相關性,并確定引起miR-155表達量變化最大的褪黑素濃度。2、選定一株膠質瘤細胞株,并選用引起miR-155表達量變化最大的濃度范圍的褪黑素處理細胞。通過CCK-8方法觀察膠質瘤細胞的增殖情況。3、通過流式細胞儀技術檢測膠質瘤細胞增殖、細胞周期及凋亡的變化。4、利用Transwell試驗檢測褪黑素對腫瘤細胞遷移、侵襲的影響。
　　第二部分:1、選定一株膠質瘤細胞,并選取引起miR-155表達量變化最大的濃度范圍的

3、褪黑素處理細胞。分別應用Western blot和qRT-PCR技術檢測細胞中MYB基因的mRNA及蛋白表達相對于對照組的變化,明確褪黑素與MYB基因的相關性。2、選同一株膠質瘤細胞,將MYB基因干擾后用qRT-PCR技術檢測細胞中miR-155的表達量相對于對照組的變化,明確MYB和miR-155的相關性。
　　結果：
　　第一部分:1、三株膠質瘤細胞U87、U373、U251經過不同濃度(100μM、1μM、1nM)褪黑

4、素處理后,miR-155的表達相對于正常對照組均明顯下降(P<0.05),其中用1μM濃度褪黑素處理的細胞株中miR-155表達下降最明顯(P<0.01)。2、經過1μM濃度褪黑素處理的U87膠質瘤細胞增殖較對照組明顯下降。3、經過1μM濃度褪黑素處理的U87膠質瘤細胞凋亡較對照組增高,而細胞周期沒有變化。4、經過1μM濃度的褪黑素處理的U87膠質瘤細胞遷移和侵襲能力較對照組明顯下降。
　　第二部分:1、經過1μM濃度褪黑素處理的

5、U87膠質瘤細胞中MYB基因的mRNA和蛋白表達量均明顯低于對照組。2、在U87膠質瘤細胞中干擾MYB基因后,miR-155的表達量下降。
　　結論：
　　本研究結果表明褪黑素通過下調MYB基因從而抑制miR-155表達,1μM濃度褪黑素可以增加腫瘤細胞的凋亡使膠質瘤細胞增殖降低,并且能抑制膠質瘤細胞的遷移和侵襲能力,進而發(fā)揮抑癌作用。本實驗闡明了褪黑素在腦膠質瘤中抑癌作用的microRNA表觀調控機制,為揭示褪黑素的抗腦膠