洋桔梗過表達(dá)枸杞LcCHYB基因提高非生物脅迫耐受性的研究.pdf

1、洋桔梗（Eustoma grandiflorum）是一種深受消費(fèi)者青睞的切花品種，但是它對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境的要求比較苛刻，這大大限制了它的大規(guī)模推廣，因此，通過提高洋桔梗植株非生物脅迫耐受性和適應(yīng)性具有重大的市場(chǎng)意義。
　　非生物脅迫導(dǎo)致植物胞內(nèi)的活性氧（ROS）大量爆發(fā)，造成植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)及酶促系統(tǒng)受到破壞。類胡蘿卜素是植物胞內(nèi)重要的非酶促抗氧化物質(zhì)，和植物抗氧化能力有很大關(guān)系。
　　本研究利用含有本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建并保存的植物雙元表達(dá)載

2、體pCambia2300-LcCHYB的農(nóng)桿菌C58將來自中華枸杞（Lycium Chinense Miller）的β-類胡蘿卜素羥化酶基因（LcCHYB）轉(zhuǎn)入White品種洋桔梗中并獲得轉(zhuǎn)基因株系，并且洋桔梗提高了對(duì)非生物脅迫的耐受性。
　　本研究得到以下結(jié)果：
　　1經(jīng)過培養(yǎng)基優(yōu)化和農(nóng)桿菌抑制實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)洋桔梗不定芽最佳生根激素濃度為0.3 mg/L NAA+0.3 mg/L IBA，卡納霉素（Kn）的最佳篩選濃度為70

3、mg/L，農(nóng)桿菌抑制最低頭孢霉素（Cef）濃度為350 mg/L。
　　2通過對(duì)轉(zhuǎn)基因型和野生型兩種洋桔梗進(jìn)行光合熒光參數(shù)進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)Fv/Fm值、ФPSⅡ值、qP值和NPQ值分別較野生型提高了28％、32%、10%和75%。
　　3利用高效液相色譜對(duì)各組類胡蘿卜素進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)生總類胡蘿卜素、β-類胡蘿卜素、葉黃素、玉米黃質(zhì)和葉黃素循環(huán)池含量均發(fā)生上調(diào)，其中總類胡蘿卜素、玉米黃質(zhì)和葉黃素循環(huán)池的相對(duì)差值分別為18.51μg

4、/g、6.28μg/g和13.10μg/g，比對(duì)照組野生型提高了23.5%、91.1%和75.0%。
　　4對(duì)各組的氧化還原酶系（SOD、POD和CAT）及MDA的檢測(cè)和分析，發(fā)現(xiàn)SOD值和POD值均發(fā)生顯著上調(diào)，轉(zhuǎn)基因型上調(diào)幅度分別是野生型的4.36倍和1.71倍，CAT和MDA則沒有顯著差異。
　　因此本研究得出結(jié)論，導(dǎo)入并表達(dá)外源LcCHYB基因提高了洋桔梗植株抗氧化脅迫的能力，從而達(dá)到對(duì)細(xì)胞的保護(hù)，非生物脅迫的耐受性