DREB轉基因煙草的獲得及其對非生物脅迫耐受性研究.pdf

1、本研究將從本塞姆氏(NicotianaBenthamiana)中分離克隆出的NbDREB1基因和從油菜中分離克隆的BnDREB1-5基因，通過農桿菌介導法對烤煙K326品種和香料煙Basma、Izmir品種進行了轉化，研究了農桿菌轉化煙草的各種影響因素，并對經分子鑒定的轉基因煙株進行了非生物逆境脅迫下的生物學特性分析，結果如下： 1.葉齡太長或太短，轉化率都不高，20d葉齡的葉片，轉化率最高；同一葉片，葉尖、葉中和葉基比較，葉中

2、的轉化率最高；預培養(yǎng)比不預培養(yǎng)有較高的轉化率，預培養(yǎng)64h，轉化率達93％：菌液濃度也影響轉化率，OD600值0.45左右的菌液濃度，轉化效果最好；暗培養(yǎng)3d，葉盤周圍出現輕微菌斑，轉化率最高。 2.轉基因和野生型煙株葉片分別點涂(100mg/L)Km液10μl，9d后觀察，野生型煙草葉片涂抹點葉色變黃，而轉基因煙草葉片沒有變化。PCR檢測69株Km抗性煙株，37株為陽性。其中35S：NbDREB1(K326)5株，rd29A：

3、NbDREB1(K326)5株，rd29A：BnDREB1-5(Izmir)14株，35S:BnDREB1-5(Izmir)10株，35S：BnDREB1-5(Basma)3株，陽性轉化率為54％。 3.轉35S：BnDREB1-5基因的香料煙Basma品種表現出良好的保水性能，上表皮細胞的氣孔密度明顯少于野生型，且上表皮氣孔開度小于野生型。對離體煙草葉片進行自然干旱脅迫7h后，野生型煙草葉片的相對電導率是轉基因煙草葉片的1.4

4、倍：轉基因煙草葉片中SOD活性比野生型煙草葉片高42％；且失水萎蔫后的復水速度快于野生型。對整體煙株進行干旱脅迫6h后，轉rd29A：BnDREB1-5基因的香料煙Izmir品種葉片中脯氨酸含量和可溶性糖含量分別是野生型的3.55倍和2.33倍；高鹽脅迫6h后，轉基因煙株比野生型煙株的脯氨酸和可溶性糖含量高，但是差異不大，可能是處理時間短，達不到生理反應的敏感程度。這些實驗結果表明，DREB類轉錄因子基因的轉入增強了煙草的非生物脅迫耐受