骨髓間質(zhì)干細胞對急性肝損傷修復(fù)作用的研究.pdf

1、目的： 探討人骨髓間質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)在體外特定條件下是否可以轉(zhuǎn)化為肝細胞樣細胞；建立小鼠急性肝損傷模型，評價經(jīng)肝臟定點注射的人MSCs對小鼠急性肝損傷的治療效果及初步探討其可能機制。 方法： 分離培養(yǎng)人骨髓間質(zhì)干細胞，采用肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor，HGF)、堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growt

2、h factor，bFGF)及損傷小鼠肝臟共培養(yǎng)等誘導(dǎo)方式，在不同時間點分別用RT-PCR和熒光定量PCR檢測肝細胞特異性基因的表達，免疫組織化學(xué)染色檢測肝細胞標志；昆明白小鼠經(jīng)10％的四氯化碳(carbon tetrachloride，CCl4)腹內(nèi)注射建立小鼠急性肝損傷模型，經(jīng)由肝臟定點注射輸入人骨髓間質(zhì)干細胞，使用RT-PCR來定位小鼠肝臟中的人源性MSCs并檢測人肝臟特異性基因，采集小鼠尾靜脈血和肝臟組織標本，檢測細胞輸注后血清

3、肝功能指標，觀察組織病理學(xué)變化，評價MSCs的治療效果并找尋修復(fù)肝損傷的機制。 結(jié)果： 在HGF和bFGF誘導(dǎo)第7天時甲種胎兒蛋白(alpha fetal protein，AFP)、細胞角蛋白18(cytokeratin-18，CK18)和色氨酸2，3-雙加氧酶(tryptophan 2，3-dioxygenase，TDO)基因表達陽性，CK18和TDO的表達隨誘導(dǎo)時間延長增高；第7天誘導(dǎo)細胞組織化學(xué)染色AFP、白蛋白(

4、albumin，ALB)、肝細胞核因子(hepatocyte nuclearfactor，HNF)、肝細胞特異性抗原(HAS)和CK-18表達陽性。與損傷小鼠組織共培養(yǎng)后MSCs形態(tài)由長梭形變?yōu)閳A形，21天后細胞表達AFP和TDO；成功建立小鼠急性肝損傷模型，利用人MSCs進行的定位實驗中，在實驗小鼠不同肝組織部位以及其他組織如心、腎、肺、脾擴增出人17α衛(wèi)星DNA序列。MSCs實驗組小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine amino

5、transferase，ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)下降水平較對照組具有明顯的差異(P<0.05)。實驗組小鼠肝臟恢復(fù)情況較對照組有明顯改善。并且在實驗組小鼠肝臟中可檢測到人肝特異性基因AFP和TDO的表達。 結(jié)論： HGF和bFGF聯(lián)合誘導(dǎo)以及與CCl4傷肝組織共培養(yǎng)的方法可體外促進人MSCs分化為肝細胞樣細胞；外源性MSCs體內(nèi)能夠歸巢到受損肝臟，并能通