骨髓間質充質干細胞治療急性肝衰的旁分泌作用的研究.pdf

1、前言:
　　 在正常成人及成年哺乳動物體內肝細胞是一種穩(wěn)定細胞,很少見到核分裂現象,而當肝臟受到損傷時,肝細胞會從低分化狀態(tài)中迅速改變,手術切除造成的肝損傷是引起肝再生的一種方法。肝細胞生長因子(Hepatocyte Growth Factor,HGF)是一個多效應生長因子,參與機體多種器官組織細胞尤其是肝細胞的生長、再生和重塑等過程。有學者發(fā)現肝部分切除后應用肝細胞生長因子與單純肝部分切除相比,肝再生指數和殘留肝臟質量明顯升高

2、,因此HGF能促進肝臟再生[1]。間充質干細胞分泌的多種細胞因子HGF,VEGF,bFGF等作用于周圍細胞發(fā)揮旁分泌作用,參與移植治療后的免疫調節(jié),調節(jié)炎癥反應,可以抑制功能細胞的凋亡,促進前體細胞的分化和增殖,并參與新生血管,改善損傷組織的微循環(huán),發(fā)揮重要的病理生理作用[2]。體外干細胞與肝細胞共培養(yǎng)的實驗證明:問充質干細胞的旁分泌物質在體外可以刺激正常肝細胞再生,抑制受損肝細胞凋亡[3].BMSCs在經門靜脈移植后干細胞在肝大部切除

3、大鼠體內的HGF表達情況目前尚未見報道。本研究將BMSCs經門靜脈移植入85%肝切除的大鼠體內。觀察肝組織內HGF表達情況,動態(tài)觀察其肝功的變化情況及肝細胞再生情況,進一步為BMSCs治療急性肝衰提供實驗依據。
　　 實驗方法:
　　 建立大鼠肝大部切除(依次切除肝臟中葉,左上葉,左下葉以及尾狀葉,保留肝右葉)術后急性肝衰模型,將同種異體骨髓間充質干細胞(BoneMesenchymalStemCells,BMSCs)經門

4、靜脈注入大鼠體內,于術后第1,4,7,14天將大鼠處死,切取肝臟組織,觀察肝臟組織學的變化情況及肝功能變化情況。應用免疫組織化學,Real-TimePCR以及WesternBlot方法檢測肝細胞生長因子(HGF)的在受體大鼠肝組織中的表達情況,檢測實驗組與對照組丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)和血漿白蛋白(ALB)等指標的差異性是否具有統計學意義。
　　 實驗結果:
　　 1、大鼠肝功能改變情況<

5、br>　　 實驗組與對照組的大鼠丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)和血漿白蛋白(ALB)等指標相比各時間點均有統計學差異。
　　 2、肝再生情況
　　 肝組織再生更為明顯,且實驗組肝組織中HGF表達量明顯高于對照組。
　　 3、肝細胞生長因子的表達情況
　　 HGF在第4d和7d的蛋白表達水平與其他時間有顯著差異,且與對照組相比較,HGF表達水平更高,4d的表達水平最高,差異具有統

6、計學意義(P＜0.05)。RealtimePCR結果顯示:HGF在4d和7dmRNA表達水平較對照組升高,差異具有顯著性(P＜0.05)。對照組與假手術組相比差異顯著(P＜0.05)。
　　 結論:
　　 骨髓間充質干細胞移植可以促進肝大部切除術造成的急性肝衰的術后恢復,實驗組肝組織中HGF的表達量明顯高于對照組。BMSCs移植可改善受損肝臟功能,促進肝細胞增殖,提高大鼠的生存率,促進肝組織再生。本實驗研究結果初步揭示了