包含黏瓊脂芽孢桿菌木聚糖酶基因在大腸桿菌中表達研究.pdf

1、木聚糖是植物細胞壁的主要成份，是自然界中儲存量第二大的可再生資源，僅次于纖維素。木聚糖的主鏈和支鏈帶有多種不同的取代基，由于木聚糖的結構復雜，其完全降解需要多種酶的共同參與。木聚糖酶又名內(nèi)切-1，4-β-D-木聚糖酶，是一種半纖維素酶，其主要作用是隨機地切斷木聚糖的主鏈生成不同長度的木寡糖，是木聚糖降解過程中的關鍵酶。目前木聚糖酶已被廣泛地應用于食品、石油、造紙和制藥等諸多領域，其需求量愈來愈大，因此倍受人們廣泛關注。
　　本研究

2、應用PCR方法從包含黏瓊脂芽孢桿菌(Bacillus agaradhaerens)的全基因組文庫中擴增木聚糖酶基因xyl A，在大腸桿菌中實現(xiàn)異源表達并對重組酶進行酶學性質(zhì)研究，得到如下主要研究結果:
　　1.從包含黏瓊脂芽孢桿菌(Bacillus agaradhaerens)的全基因組文庫中擴增得到的木聚糖酶基因全長632bp，編碼210個氨基酸，無信號肽序列。對其進行生物信息學分析發(fā)現(xiàn)其具有Glyeo-hydro-11保守結構

3、域，屬于G11家族木聚糖酶。
　　2.將克隆的木聚糖酶基因連接到原核表達載體pET-22b中，成功構建了重組質(zhì)粒并在大腸桿菌BL21中獲得表達。通過優(yōu)化培養(yǎng)基和誘導條件等因素，在最優(yōu)條件下測得上清液酶活力為3729U/mL，是出發(fā)菌株的2.3倍。
　　3.對重組蛋白的酶學性質(zhì)分析結果表明，該酶的最適反應溫度為55℃，最適pH值為8.0。Zn2+、Fe3+、Ca2+和Cu2+對重組酶的活力均有抑制作用，其中Cu2+對重組酶活力