經典Wnt信號通路對BMP9誘導干細胞骨向分化的影響及機制研究.pdf

1、目的：
　　探討經典Wnt信號通路與骨形態(tài)發(fā)生蛋白9(bone morphogenetic protein9，BMP9)誘導小鼠間充質干細胞C3H10T1/2細胞骨向分化的相互影響及分子機制。
　　方法：
　　1、以小鼠間充質干細胞C3H10T1/2為目的細胞，根據(jù)不同的處理因素將其分為4個組：GFP組、BMP9組、Wnt3a組、BMP9+Wnt3a組：
　　2、通過染色和定量測定早期成骨標志堿性磷酸酶(ALP)

2、的活性；
　　3、應用Western blotting、Q-PCR檢測晚期成骨標志骨鈣蛋白(OC)、骨橋蛋白(OPN)的表達；
　　4、應用茜素紅染色檢測鈣鹽沉積的情況；
　　5、應用Western blotting、Q-PCR檢測成骨轉錄因子Runx2的表達；
　　6、應用異位成骨動物模型進行進一步驗證二者對干細胞成骨分化的相互影響。
　　結果：
　　1、在加入處理因素后第7天進行ALP染色和活性測

3、定，發(fā)現(xiàn)Wnt3a+BMP9組的ALP活性比BMP9組、Wnt3a組明顯增高(P<0.01)。
　　2、第14天進行茜素紅染色觀測鈣鹽沉積，結果發(fā)現(xiàn)從大體標本可以看到從GFP組、Wnt3a組、BMP9組、BMP9+Wnt3a組顏色有遞增的趨勢，鏡下發(fā)現(xiàn)BMP9+Wnt3a組的鈣鹽結節(jié)要明顯多于BMP9組、Wnt3a組。
　　3、在第9天應用Western blotting和Q-PCR檢測OC、OPN的表達，結果發(fā)現(xiàn)OC和OP

4、N的表達在BMP9+Wnt3a組高于BMP9組和Wnt3a組。
　　4、在第2天應用Western blotting和Q-PCR檢測Runx2的表達，結果發(fā)現(xiàn)Runx2在BMP9+Wnt3a組中的表達要高于BMP9組和Wnt3a組
　　5、動物體內接種4W后取出異位成骨的骨塊，觀測大體標本以及進行HE、Masson染色，結果顯示BMP9+Wnt3a組的骨塊大于BMP9組和Wnt3a組(P<0.05)，通過HE、Masson染