高脂培養(yǎng)條件下槲皮素對大鼠肝細胞膽固醇代謝的影響.pdf

1、目的：
　　在高脂環(huán)境下，用不同濃度的槲皮素干預大鼠肝細胞，測定干預后細胞內(nèi)外膽固醇含量的變化情況，同時檢測細胞活力，選定適宜的干預劑量；從細胞和分子水平上分析槲皮素對膽固醇代謝的具體作用，揭示槲皮素可能的作用機制，為充分認識植物化學物作用的多樣性以及合理應用提供理論和實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1．高脂血清的制備：灌胃給予雄性Wistar大鼠高脂乳劑一周，建立大鼠高脂血癥模型，實驗結(jié)束后，無菌條件下眼眶取血，離心取血

2、清。
　　2．高脂培養(yǎng)模型的建立：測定正常組和高脂組血清中膽固醇相關指標，判定高脂血癥模型是否建立成功，然后用10％高脂血清加90%培養(yǎng)液配制成高脂血清培養(yǎng)液。
　　3.槲皮素適宜干預濃度的探討：首先采用含0、5、10和20μmol/L槲皮素的10%胎牛血清培養(yǎng)液干預培養(yǎng)BRL肝細胞24h，換液，用含0、5、10和20μmol/L槲皮素的10%高脂血清培養(yǎng)液干預培養(yǎng)BRL肝細胞48h，實驗結(jié)束后進行細胞活力和細胞凋亡相關指標

3、的檢測，然后測定培養(yǎng)液和細胞內(nèi)膽固醇相關指標的變化。
　　4．在上述實驗的基礎上，選定最適干預濃度，實驗方法同上，進一步研究槲皮素對BRL肝細胞膽固醇代謝影響，實驗結(jié)束時測定細胞內(nèi)調(diào)節(jié)膽固醇代謝的蛋白，以及關鍵酶的表達與活性。
　　結(jié)果：
　　1．灌胃給予雄性Wistar大鼠高脂乳劑一周后，無菌條件下取血，離心取血清，血清中TC、FCH和LDL-C含量與灌胃前比較均顯著升高。
　　2.分別用含10%正常血清和10

4、%高脂血清培養(yǎng)液培養(yǎng)肝細胞24h后，測定培養(yǎng)液中膽固醇相關指標，發(fā)現(xiàn)高脂培養(yǎng)液中TC、 FCH和LDL-C均顯著高于正常培養(yǎng)液；用10%正常血清培養(yǎng)肝細胞24h后，換液為10%高脂血清繼續(xù)培養(yǎng)48h，發(fā)現(xiàn)高脂血清干預后細胞內(nèi)的TC和FCH含量均顯著升高。
　　3.在高脂環(huán)境下，用不同濃度的槲皮素干預大鼠肝細胞后，MTT檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)與其他三組相比20μmol/L槲皮素可使細胞活力顯著下降，且隨著槲皮素濃度的升高，AST和ALT均有上

5、升趨勢,但LDH無明顯變化，可能是相關指標不敏感。細胞凋亡檢測結(jié)果顯示隨著槲皮素濃度的升高，細胞凋亡率升高，且20μmol/L槲皮素組與0、5μmol/L組有顯著差異，所以我最終選擇10μmol/L槲皮素為干預劑量。
　　4．在高脂環(huán)境下，用不同濃度的槲皮素干預BRL肝細胞后，實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著槲皮素濃度的升高，培養(yǎng)液中的TC、FCH和CE濃度均下降，LDL-C濃度變化無統(tǒng)計學意義。與0μmol/L槲皮素相比較，10和20μmol/

6、L槲皮素可顯著降低培養(yǎng)液中TC、FCH和CE含量；同時隨著槲皮素濃度的
　　升高細胞內(nèi)TC和FCH含量雖有一定的下降趨勢，但無統(tǒng)計學差異,CE含量無明顯變化。
　　5.與對照組相比較，10μmol/L槲皮素顯著降低HMGCR活性及其mRNA和蛋白的表達,顯著升高LDLR、SREBP-2、ABCA1和LXRαmRNA和蛋白的表達。
　　結(jié)論：
　　在高脂環(huán)境下，10μmol/L槲皮素干預對BRL肝細胞膽固醇代謝有顯