淫羊藿苷、槲皮素對高糖培養(yǎng)SD大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響及其機制研究.pdf

1、目的：
　　探討淫羊藿苷、槲皮素對高糖培養(yǎng)海馬神經(jīng)元凋亡的影響及其作用機制。
　　方法：
　　取新生24h SD大鼠海馬，消化法分離海馬神經(jīng)元，密度梯度離心法和差速貼壁法進行純化，神經(jīng)元特異性烯醇化酶蛋白免疫熒光法進行鑒定。
　　選擇25mmol/L濃度葡萄糖為正常對照組，根據(jù)課題組既往實驗結(jié)果，選取72h和50mmol/L濃度葡萄糖為高糖模型組。
　　在50mmol/L Glu的高糖培養(yǎng)基中，分別加入不同

2、濃度梯度的淫羊藿苷、槲皮素、Akt抑制劑MK-22062HCI和激動劑SC79。培養(yǎng)72h，CCK-8探索各藥物最佳作用濃度及其對高糖條件下海馬神經(jīng)元相對活性的影響。
　　流式細胞儀檢測正常對照組、高糖模型組、淫羊藿苷組、槲皮素組、淫羊藿苷+Akt抑制劑組、槲皮素+Akt抑制劑組、Akt激動劑組神經(jīng)元的凋亡。
　　Western Blotting檢測各組神經(jīng)元p-Akt、Akt、Bcl-2和Bax蛋白表達。
　　結(jié)果：

3、
　　1.成功培養(yǎng)海馬神經(jīng)元，經(jīng)鑒定純度96.5±1.2％。
　　2.CCK-8探索各藥物最佳作用濃度及其對高糖條件下海馬神經(jīng)元相對活性的影響:與正常對照組相比，高糖組細胞相對活性降低(P＜0.05);與高糖組比較，不同濃度淫羊藿苷組、槲皮素組、Akt激動劑組細胞相對活性均升高，選擇淫羊藿苷0.001μmol/L濃度、槲皮素0.01μmol/L濃度、Akt抑制劑0.3μmol/L濃度、Akt激動劑5μg/mL濃度為最佳作用濃

4、度。
　　3.流式細胞儀檢測細胞凋亡:與正常對照組比較，高糖組神經(jīng)元凋亡率增加(P＜0.01);與高糖組比較，淫羊藿苷組、槲皮素組、Akt激動劑組神經(jīng)元凋亡率均減少(P＜0.01);與淫羊藿苷+Akt抑制劑組比較，淫羊藿苷組凋亡率減少(P＜0.01);與槲皮素+Akt抑制劑組比較，槲皮素組凋亡率減少(P＜0.01);與Akt激動劑組比較，淫羊藿苷組、槲皮素組凋亡率差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　4.Western B

5、lotting檢測蛋白表達:
　　(1)淫羊藿苷:與正常對照組比較，高糖組p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax比值均減少(P＜0.01);與高糖組比較，淫羊藿苷組、Akt激動劑組p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax比值均升高（淫羊藿苷組p-Akt/Akt:P＜0.05;余:P＜0.01）;與淫羊藿苷+Akt抑制劑組比較，淫羊藿苷組p-Akt/Akt、Bcl-2/Bax的比值均升高(P＜0.01);與Akt激動劑組比較，淫羊藿苷

6、組p-Akt/Akt、Bcl-2/Bax的比值均減少(P＜0.01)。
　　(2)槲皮素:與正常對照組比較，高糖組p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax比值均減少(P＜0.01);與高糖組比較，槲皮素組、Akt激動劑組p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax比值均升高(P＜0.01);與槲皮素+Akt抑制劑組比較，槲皮素組p-Akt/Akt、Bcl-2/Bax的比值均升高(P＜0.01);與激動劑組比較，槲皮素組，Bcl-2/Bax

7、的比值減少(P＜0.05)，p-Akt/Akt的比值差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.高糖條件下，海馬神經(jīng)元的凋亡增加，海馬神經(jīng)元p-Akt/Akt、Bcl-2/Bax較正常對照組明顯降低，提示Akt信號通路受到抑制。
　　2.淫羊藿苷、槲皮素能夠減輕高糖培養(yǎng)下海馬神經(jīng)元的凋亡，其作用機制與增加Akt信號通路中Akt蛋白磷酸化的程度，進而增加Bcl-2蛋白的表達，抑制Bax蛋白的表達有關(guān)。