天冬酰胺合成酶B體外篩選模型的構(gòu)建與應(yīng)用.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩51頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、天冬酰胺合成酶B（AS-B）是一個廣泛存在于植物和微生物體內(nèi)催化天冬酰胺合成的關(guān)鍵性酶，已經(jīng)證實為除草劑環(huán)庚草醚的靶標酶。本研究構(gòu)建了AS-B的原核表達載體，用大腸桿菌表達系統(tǒng)表達了AS-B，并對其進行了純化及活性測定。使用已知除草劑環(huán)庚草醚及1, 4-桉樹腦對所構(gòu)建的篩選模型進行了驗證，并應(yīng)用此模型對本實驗室篩選得到的四株放線菌的發(fā)酵產(chǎn)物進行篩選。主要研究結(jié)果如下：
　　 (1) 將本研究克隆得到的大豆AS-B基因按正確閱讀框

2、克隆到原核表達載體pET30a (+)，并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Rosetta (DE3) pLysS，對誘導(dǎo)劑濃度、誘導(dǎo)時間進行了摸索，獲得蛋白的最佳表達條件。結(jié)果表明，當(dāng)IPTG終濃度為0.5 mM，于16 ℃下誘導(dǎo)培養(yǎng)14 h時目的蛋白表達量最高，約60％的目的蛋白以可溶性形式存在。
　　 （2）將獲得的可溶性AS-B在4 ℃條件下用鎳柱純化去除雜蛋白，再經(jīng)LH-20葡聚糖凝膠柱脫鹽，最終可獲得純度大于90％的AS-B。使用高效液

3、相色譜法對酶活性進行測定，當(dāng)以Gln和NH4Cl為氮源時，測得酶比活值分別為2.32 μmol/min﹒mg與2.6 μmol/min﹒mg。
　　 （3）用已知靶標除草劑環(huán)庚草醚和化合物1, 4-桉樹腦對此篩選模型進行驗證，結(jié)果表明1, 4-桉樹腦可以抑制AS-B的活性，其I50 值為0.03 μg/mL，而環(huán)庚草醚對AS-B活性沒有明顯抑制，這與文獻報道相符，證明已成功構(gòu)建AS-B體外篩選模型。
　　 (4) 應(yīng)用此

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論