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1、本研究應(yīng)用簡(jiǎn)單重復(fù)序列區(qū)間擴(kuò)增(ISSR)分子標(biāo)記技術(shù),對(duì)中國(guó)北方沿海的長(zhǎng)竹蟶(Gould)野生群體的遺傳多樣性進(jìn)行了研究。從群體遺傳學(xué)角度揭示了長(zhǎng)竹蟶野生群體的遺傳結(jié)構(gòu),對(duì)其種質(zhì)資源的遺傳多樣性進(jìn)行了評(píng)估,探討了不同野生群體之間的遺傳關(guān)系,以期為保護(hù)和合理利用長(zhǎng)竹蟶的種質(zhì)資源提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下: ⑴通過(guò)優(yōu)化ISSR-PCR反應(yīng)體系,從30個(gè)ISSR引物中篩選出13個(gè)用于ISSR分析。13個(gè)引物均顯示出不同程度的多態(tài)
2、性,在5個(gè)群體100只個(gè)體中共檢測(cè)到326個(gè)位點(diǎn),平均每個(gè)引物記錄15.4個(gè)位點(diǎn),擴(kuò)增產(chǎn)物的分子量大多在200 bp~1500 bp之間。 ⑵多態(tài)位點(diǎn)比例和Shannon's指數(shù)是衡量群體遺傳多樣性的重要指標(biāo)之一。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:大連、煙臺(tái)、萊州、青島、贛榆5個(gè)群體的多態(tài)位點(diǎn)比例分別為60.43%、43.56%、52.15%、49.08%、57.98%。顯示大連、贛榆群體的多態(tài)位點(diǎn)比例明顯高于其他3個(gè)群體,結(jié)合Shannon's信
3、息指數(shù)(D和Nei's基因多樣性指數(shù)(h)看,大連與贛榆群體的遺傳多樣性水平較高,青島與萊州群體次之,而煙臺(tái)群體是5群體中遺傳多樣性水平最低的。 ⑶通過(guò)對(duì)大連、煙臺(tái)、萊州、青島、贛榆5個(gè)群體之間的遺傳相似系數(shù)和遺傳距離進(jìn)行分析的結(jié)果顯示:煙臺(tái)與萊州之間的遺傳距離最大,青島與贛榆群體間的遺傳距離最小。表明在長(zhǎng)竹蟶5個(gè)自然群體中,青島與贛榆之間的親緣關(guān)系較近,煙臺(tái)與萊州群體間的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。 ⑷Nei's基因多樣性指數(shù)(h)
4、和Shannon's信息指數(shù)(I)在群體水平上分別為0.1674和0.2530,在物種水平上分別為0.2854和0.4390,顯示出長(zhǎng)竹蟶群體擁有較高的遺傳多樣性水平,物種水平的遺傳多樣性高于群體水平。群體內(nèi)遺傳多態(tài)度比例(Hpop/Hsp)為0.5445,群體間遺傳多態(tài)度比例(Hsp-Hpop)/Hsp為0.4555,即長(zhǎng)竹蟶群體發(fā)生的遺傳變異有54.45%存在于群體內(nèi),45.55%的變異存在于群體間,說(shuō)明群體內(nèi)的變異是導(dǎo)致群體間分化
5、的重要因素。 ⑸利用AMOVA的等級(jí)剖分法得出的群體間和群體內(nèi)對(duì)總的遺傳變異的貢獻(xiàn)率表明,長(zhǎng)竹蟶47.71%的變異發(fā)生在群體間,52.29%的變異發(fā)生在群體內(nèi),顯著性檢驗(yàn)顯示長(zhǎng)竹蟶群體間和群體內(nèi)均有極顯著的遺傳分化(Фst=0.4770,P<0.001),這與上述4所得結(jié)果的趨勢(shì)是一致的。 ⑹長(zhǎng)竹蟶5群體之間的基因分化系數(shù)(Gst)均值為0.2889,由Gst估算的基因流(Nm)為1.3194。這表明5群體之間存在著有效
6、的基因流,遺傳漂變不是影響長(zhǎng)竹蟶群體遺傳分化的主要因素;引起長(zhǎng)竹蟶群體遺傳分化的因素可能與其繁育方式、各居群之間分布不連續(xù)造成的地理隔離、以及人為過(guò)度采捕導(dǎo)致資源量減少等因素有關(guān)。 ⑺根據(jù)群體間以及個(gè)體間的遺傳距離,用MEGA V4.0軟件中的鄰接法(Neighbor-Joining,NJ),分別對(duì)5個(gè)群體以及全部樣品的100只個(gè)體進(jìn)行聚類分析的結(jié)果顯示:長(zhǎng)竹蟶5群體中,青島和贛榆2個(gè)群體先聚成一支,再與大連和萊州群體聚為一支,
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