BRCA1結(jié)合蛋白BRAP促進(jìn)食管癌侵襲轉(zhuǎn)移.pdf

1、目的：腫瘤轉(zhuǎn)移是癌癥患者死亡的主要原因，但其分子機(jī)制并未完全闡明。多項(xiàng)研究已經(jīng)表明與腫瘤發(fā)生相關(guān)的基因也可能影響腫瘤的轉(zhuǎn)移。因此本課題研究的目的是為了闡明實(shí)驗(yàn)室前期通過(guò)全基因組關(guān)聯(lián)研究(Genome-wide association study,GWAS)發(fā)現(xiàn)的易感基因能否影響腫瘤的轉(zhuǎn)移。
　　方法：首先運(yùn)用高通量siRNA文庫(kù)結(jié)合細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)對(duì)食管癌11個(gè)易感區(qū)段內(nèi)的47個(gè)基因進(jìn)行篩選及功能注釋。利用慢病毒載體在食管癌細(xì)胞(KY

2、SE30和KYSE150)以及HeLa細(xì)胞中將遷移相關(guān)基因進(jìn)行敲降和過(guò)表達(dá)，體外分析擾動(dòng)其表達(dá)對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。另外通過(guò)裸鼠尾靜脈注射癌細(xì)胞構(gòu)建裸鼠肺轉(zhuǎn)移瘤模型，體內(nèi)分析敲降其表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞在裸鼠肺部定植的影響。進(jìn)一步通過(guò)熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)、免疫熒光、免疫印跡以及免疫共沉淀等實(shí)驗(yàn)，分析易感基因影響腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。另外采用實(shí)時(shí)定量PCR、免疫印跡以及免疫組化的方法，從mRNA水平和蛋白水平上檢測(cè)易感基因在食管癌組織以及

3、癌旁組織中的表達(dá)情況，并通過(guò)Log-rank生存分析的方法，分析其表達(dá)和患者生存的關(guān)系。
　　結(jié)果：通過(guò)高通量篩選，發(fā)現(xiàn)BRAP(BRCA1結(jié)合蛋白)是一個(gè)腫瘤細(xì)胞遷移相關(guān)基因，敲降BRAP的表達(dá)能夠降低腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲能力以及腫瘤細(xì)胞在裸鼠肺部的定植。高表達(dá)BRAP能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲能力，其機(jī)制是通過(guò)促進(jìn)蛋白激酶PKCα和IKKβ的結(jié)合，使IKKβ發(fā)生磷酸化，進(jìn)而激活NF-κB信號(hào)通路，最終促進(jìn)NF-κB靶基因MMP9