miR-10b調控HOXD10在食管癌侵襲、轉移中的研究.pdf

1、目的:通過檢測miR-10b及其潛在靶基因HOXD10在食管癌細胞及組織中的表達，在細胞中進行基因轉染及敲除，檢測轉染前后細胞的核酸和蛋白表達變化以及侵襲遷移能力的改變情況，探討二者的調控關系及在食管癌中侵襲、轉移的作用。
　　方法:通過熒光定量 PCR技術及蛋白免疫印跡技術驗證30對食管癌組織及癌旁組織和食管癌細胞系KYSE30、KYSE70、KYSE140、KYSE150、EC9706、食管永生化上皮SHEE及其癌變細胞系SH

2、EEC中miR-10b的表達，分析其表達與臨床病理特征的關系，對患者進行電話隨訪并分析 miR-10b對患者生存預后的影響。利用生物信息軟件預測到下游靶基因為 HOXD10，驗證 HOXD10在食管組織和細胞上的表達，并用慢病毒表達載體對 miR-10b低表達食管癌細胞株KYSE30、KYSE140進行過表達轉染及對 miR-10b高表達食管癌細胞株 EC9706進行敲除，用 RT-PCR和 Western Blot方法檢測 HOXD1

3、0的表達改變的情況，闡明miR-10b對HOXD10調控關系，通過Wound healing實驗和Transwell實驗檢測轉染及抑制前后細胞株的侵襲、遷移能力，并檢測促轉移因子 MMP-9的表達情況，探明miR-10b調控HOXD10基因在食管癌侵襲轉移中的作用。
　　結果:
　　1.食管癌細胞和組織中 miR-10b的表達：食管癌細胞系中， KYSE30、KYSE70、KYSE140、KYSE150細胞系上miR-10b

4、表達較低，EC9706表達較高，人食管永生化上皮 SHEE較其癌變細胞系 SHEEC表達低；在組織中，食管癌組織較對應食管癌旁正常組織 miR-10b表達較高，在癌中淋巴結發(fā)生轉移組 miR-10b較未發(fā)生轉移高，與年齡、性別、腫瘤大小、分化程度無關；miR-10b高表達組與低表達組對生存期的影響無明顯差異。
　　2.食管癌細胞和組織中 HOXD10的表達：在食管癌細胞系中， HOXD10 mRNA的表達在 KYSE30、KYSE

5、70、KYSE140中表達較高，其余較低， HOXD10蛋白水平表達最高的是 KYSE140，最低的是 KYSE150；在食管組織中，食管癌組織 HOXD10 mRNA水平較對應食管癌旁正常組織較低，蛋白水平同樣癌組織低于癌旁組織。
　　3. miR-10b調控 HOXD10基因的表達：生物信息學軟件預測提示， HOXD10可能是 miR-10b靶基因之一，在不同細胞系用慢病毒載體過表達或抑制 miR-10b，HOXD10蛋白表達

6、下調或上調，對 HOXD10 mRNA水平無明顯影響。
　　4. miR-10b促進食管癌細胞的遷移和侵襲：劃痕實驗和細胞遷移侵襲實驗中， miR-10b在細胞系過表達和抑制前后，細胞的遷移、侵襲能力隨著 miR-10b表達上調或下調而增加或降低。敲除HOXD10之后，也可以促進細胞的遷移和侵襲，效果類似miR-10b過表達。
　　5. HOXD10可負調控促轉移因子 MMP-9影響食管癌侵襲轉移：細胞系中HOXD10基因抑