粗毛栓菌atp9基因的克隆、原核表達(dá)及進化分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、粗毛栓菌作為一種白腐真菌,可以有效地降解自然界中廣泛存在的木質(zhì)素,在環(huán)境保護和資源再生領(lǐng)域都有著相當(dāng)廣泛的應(yīng)用前景。在生物體內(nèi),ATP合酶是能量代謝的關(guān)鍵酶,參與生命體中的多種光合磷酸化以及氧化磷酸化反應(yīng)。其中atp9基因的功能是負(fù)責(zé)編碼ATP合酶A亞基上的第9亞單位,是編碼ATP合酶基因的重要組成部分,這部分基因片段的功能與呼吸作用和光合作用有相當(dāng)密切的關(guān)聯(lián)。由于atp9基因在進化過程中高度保守,本研究根據(jù)已知近緣真菌的基因序列,設(shè)計

2、并合成了一對引物,由粗毛栓菌的mRNA反轉(zhuǎn)錄從而得到cDNA,以此第一鏈作為模板,利用PCR技術(shù)得到粗毛栓菌的編碼部分ATP合酶的atp9基因的完整序列,并將其連接于已處理好的原核表達(dá)載體上。此后進行了一系列的測序與進化分析的結(jié)果表明:該克隆片段全長222個堿基對,一共編碼了73個氨基酸,其翻譯的蛋白質(zhì)的分子量為7.35kD。轉(zhuǎn)化大腸桿菌后經(jīng)IPTG(異丙基硫代半乳糖苷)誘導(dǎo),能夠快速且高效地表達(dá)所需的外源融合蛋白,其產(chǎn)物的分子量大小與

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