水貂α,β-干擾素基因的克隆、表達(dá)與遺傳進(jìn)化分析.pdf

1、干擾素(Interferon，IFN)是一類由細(xì)胞分泌的，至少在同種細(xì)胞上具有廣譜抗病毒、抗細(xì)胞分裂、免疫調(diào)節(jié)活性和在不同途徑上影響細(xì)胞的代謝、生長和分化的蛋白質(zhì)。目前已有商品化的豬、雞、犬等重組干擾素產(chǎn)品在市場上應(yīng)用，但是水貂干擾素國外還未見相關(guān)報道。國內(nèi)僅中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所野生動物人獸共患病研究室應(yīng)用RT-PCR方法從體外誘導(dǎo)的水貂外周血淋巴細(xì)胞中擴(kuò)增出水貂的α干擾素13種基因(MiIFN-α)亞型，其他還未見相關(guān)報道。近幾年

2、我國毛皮動物產(chǎn)業(yè)發(fā)展較迅速，是國際上少數(shù)毛皮動物養(yǎng)殖業(yè)發(fā)達(dá)的國家之一，尤其在吉林、遼寧、黑龍江、河北、山東、內(nèi)蒙古等地區(qū)，養(yǎng)殖水貂已成為當(dāng)?shù)剞r(nóng)民增收致富的主要途徑，目前水貂存欄量達(dá)3000萬只，毛皮動物產(chǎn)業(yè)是我國農(nóng)村產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整的重要產(chǎn)業(yè)。近年來，貂、狐貍、貉等犬科動物作為特種經(jīng)濟(jì)動物飼養(yǎng)正在興起，而犬科動物各種病毒性疾病是造成死亡的最重要原因。干擾素對病毒具有廣譜、特效的抗病毒感染作用。所以，為進(jìn)行犬科動物干擾素制劑的研究，我將從以下

3、幾個方面進(jìn)行研究，為重組水貂干擾素的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)，并且分析針對一種犬科動物的干擾素是否適用于所有犬科動物，為臨床治療及飼養(yǎng)管理提供指導(dǎo)。
　　 1.根據(jù)GenBank上發(fā)表的雪貂IFN-α基因(EU863613.1)，雪貂IFN-β基因(EF581890.1)cDNA全序列，在閱讀框外側(cè)兩端保守區(qū)分別設(shè)計(jì)一對引物；直接從脾臟組織中提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄后以cDNA作為模板擴(kuò)增IFN-α和IFN-β基因，獲得了MiIFN-α基因和

4、MiIFN-β全長基因，MiIFN-α長度為564bp；MiIFN-β基因全長為561bp。將水貂IFN-α基因序列與GenBank上收錄的雪貂(EU863613.1)核苷酸同源性為94.3％，氨基酸同源性為89.3％；與雪貂(EU863614.1)核苷酸同源性為95.0％，氨基酸同源性為90.9％；與雪貂(EU863615.1)核苷酸同源性為95.5％，氨基酸同源性為91.4％。水貂IFN-β基因序列與GenBank上收錄的雪貂(EF

5、581890.1)核苷酸同源性為100.0％，氨基酸同源性為100.0％；與雪貂(EF368208.1)核苷酸同源性為98.2％，氨基酸同源性為98.4％。另外，將擴(kuò)增的基因序列與犬、貉、赤狐、大熊貓進(jìn)行基因序列比對，發(fā)現(xiàn)MiIFN-α核苷酸序列同源性78.1％-99.3％之間。氨基酸同源性在66.3％-98.4％之間。犬和赤狐的IFN-α親緣關(guān)系最近(同源性接近98.0％)，犬和貉的IFN-α親緣關(guān)系也比較近(同源性達(dá)98.0％)，而

6、水貂和赤狐、貉、犬的親緣關(guān)系相對較遠(yuǎn)(基因同源性79.1％左右，氨基酸同源性66.3％～67.9％)。MiIFN-β核苷酸序列同源性在83.0％～100.0％之間，氨基酸同源性在69.4％-100.0％。水貂與雪貂、犬與赤狐的IFN-β親緣關(guān)系最近(同源性為100.0％)，犬和貉的IFN-β親緣關(guān)系也比較近(同源性達(dá)98.4％)，而水貂和赤狐、貉、犬的親緣關(guān)系相對較遠(yuǎn)(基因同源性86.0％左右，氨基酸同源性73.7％～75.3％)。