膠體金刺突長度對赭曲霉毒素A免疫層析試紙條檢測性能影響的研究.pdf

1、本文初步探討了多枝狀膠體金刺突長度對免疫層析試紙條檢測性能的影響。分別采用檸檬酸三鈉還原法和種子介導生長法合成了無刺突球狀，短刺突多枝狀和長刺突多枝狀三種膠體金，粒子粒徑均為30-40 nm；采用以上三種膠體金研制了赭曲霉毒素A（Ochratoxin A, OTA）的免疫層析試紙條；以試紙條T/C比值法建立了赭曲霉毒素A的試紙條定量檢測方法；系統(tǒng)評價以三種膠體金為探針時，每張試紙條的抗體以及探針消耗量、50％的競爭抑制濃度（Half m

2、aximal inhibitory concentration, IC50）、試紙條定量檢測的最低檢測限（Limit of detection, LOD）及所需的平衡反應時間等指標差異；并進一步分析了三種金標納米探針分別與檢測線以及質(zhì)控線結(jié)合的動力學變化。
　　制備三種試紙條的主要參數(shù)如下：NC膜檢測線上OTA-BSA濃度為1.2 mg/mL，質(zhì)控線二抗?jié)舛葹?.4 mg/mL；抗赭曲霉毒素A腹水標記三種探針量（無刺突球狀、短刺突

3、多枝狀和長刺突多枝狀）為4.5μg/mL；結(jié)合墊上三種金標抗體納米探針的噴涂量分別為4.0μL/cm，2μL/cm和0.8μL/cm（保證T線顯色強度基本一致）。在此條件下，無刺突球狀、短刺突多枝狀及長刺突多枝狀三種膠體金試紙條T/C比值進入平衡的時間分別為17 min，15 min和12 min，表明長刺突多枝狀膠體金在試紙條上具有更快的釋放速率和涌動速率；平衡時三種試紙條T/C比值分別為0.67±0.03，0.95±0.01和1.2

4、9±0.02，以上數(shù)據(jù)顯示長刺突多枝狀金納米粒子與T線抗原具有更強的結(jié)合能力；三種膠體金試紙條定量曲線采用四參數(shù)進行模擬擬合，具體方程分別如下：y=145.6914/[1+(x/2.9255)-1.0554]-1.8735(R2=0.9903，無刺突球狀膠體金探針)，y=259.0171/[1+(x/5.4329)-0.7548]-1.1688(R2=0.9937，短刺突多枝狀膠體金探針)和y=226.9642/[1+(x/1.9879

5、)-1.0601]+0.0713(R2=0.9960，長刺突多枝狀膠體金探針)，定性檢測閾值分別為5 ng/mL、3 ng/mL和2 ng/mL，IC50分別是1.68 ng/mL、0.84 ng/mL及0.61 ng/mL；LOD分別為0.29 ng/mL，0.1 ng/mL和0.07 ng/mL。其中，長刺突多枝狀膠體金試紙條的定性檢測閾值、定量檢測的IC50和LOD分別是無刺突球狀膠體金試紙條的2.5、2.75和4.14倍。