家蠅小熱休克蛋白(hsp20.6)基因的克隆和表達分析

1、《中國圖書資料分類法》分類號：Q7 單位代碼：10660 學 號：S100037 貴陽醫(yī)學院 貴陽醫(yī)學院 2013 碩士學位論文 碩士學位論文 家蠅小熱休克蛋白（ 家蠅小熱休克蛋白（HSP20.6 HSP20.6）基因的克隆 ）基因的克隆 和表達 表達分析 分析 研 究 生：李顯航 導 師：張春林（教授） 劉紅美（副教授） 年 級：2010 級 專 業(yè)：細胞生物學

2、 2103 年 4 月 25 日1 家蠅小熱休克蛋白（HSP20.6）基因的克隆和表達分析 專業(yè)名稱：細胞生物學 研 究 生：李顯航 導 師：張春林 教授 劉紅美 副教授 摘要： 摘要：目的：克隆家蠅小熱休克蛋白 Hsp20.6 基因，研究該基因在家蠅各生長發(fā)育階段的表達情況， 并進行原核表達， 為最終闡明其生物學功能奠定基礎(chǔ)。 方法：應用生物信息學方法分析家蠅小熱休克蛋白 Hsp20.6 理化性質(zhì)、 疏水性、 跨膜區(qū)和信號

3、肽、膜體分析、二級結(jié)構(gòu)功能域、預測功能，進行多重序列比對與系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建和三級結(jié)構(gòu)建模。分別采用半定量 RT-PCR 與實時熒光定量 PCR 研究Hsp20.6 在家蠅卵、3 日齡幼蟲、蛹、成蟲 4 個生長發(fā)育階段及成蟲頭部、胸部、腹部不同組織中的表達情況。利用 pET28a（+）原核表達載體構(gòu)建家蠅小熱休克蛋白 Hsp20.6 基因的重組表達載體，并進行誘導表達與產(chǎn)物純化。結(jié)果：1、生物信息學分析表明家蠅小熱休克蛋白 Hsp20.6

4、為親水蛋白，分子量為 20.64kD，等電點為 5.66，不具有跨膜區(qū)和信號肽，有一個 HSP20 的結(jié)構(gòu)域，二級結(jié)構(gòu)主要為α螺旋和無規(guī)則卷曲， 該蛋白三維結(jié)構(gòu)為棒狀結(jié)構(gòu)， 其 C 端有 7 個片層結(jié)構(gòu)。進化樹顯示，家蠅小熱休克蛋白 Hsp20.6 與昆蟲中的直系同源小熱休克蛋白（orthologous small heat shock protein）聚為一類。2、半定量 PCR 與實時熒光定量 PCR 表明家蠅小熱休克蛋白 Hsp2

5、0.6 為組成型表達， 而且熱誘導能上調(diào)該基因在家蠅卵、3 日齡幼蟲、蛹、成蟲 4 個生長發(fā)育時期的表達，上調(diào)量以幼蟲和成蟲兩時期為大。 在成蟲中則以頭部組織上調(diào)最為明顯。 3、 成功構(gòu)建 pET28a（+）- Hsp20.6 重組表達載體，IPTG 誘導表達產(chǎn)物大小與生物信息學預測結(jié)果相當。結(jié)論：家蠅小熱休克蛋白 Hsp20.6 基因為組成型表達，熱誘導能上調(diào)該基因表達， 生長時期以幼蟲和成蟲上調(diào)最為明顯， 在成蟲頭部組織中表達上調(diào)量