28999.四種海藻熱休克蛋白70(hsp70)基因的克隆與表達分析_第1頁
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1、中國科學院海洋研究所博士學位論文四種海藻熱休克蛋白70（HSP70）基因的克隆與表達分析姓名：付萬冬申請學位級別：博士專業(yè)：海洋生物學指導教師：段德麟20090603付萬冬四種海藻熱休克蛋白70(HSP70)基因的克隆與表達分析中科院海洋研究所博十學位論文海帶HSP70mRNA表達量呈先上升后下降趨勢。熱激1h后海帶HSP70mRNA表達量迅速上升，熱激7h后mRNA表達量達到最大，是對照組表達量的4倍。不同鹽度(O‰45‰)脅迫處理組

2、中，09／00或59／00鹽度處理組的海帶HSP70mRNA表達量是309／00鹽度處理組海帶HSP70mRNA表達量的3倍。35‰、40‰和459／00鹽度處理組之間HSP70mRNA表達量較低且無顯著差異。不同熱激溫度(540℃)處理組中，20℃或25℃處理的孔石莼HSP70mRNA表達量較低，而5℃、35℃、或40℃處理組的孔石莼HSP70mRNA的表達量是25℃處理組孔石莼HSP70mRNA表達量的2倍以上。30℃不同熱激時間(

3、012h)處理組中，孔石莼HSP70mRNA表達量也呈先上升后下降趨勢。熱激5h后孔石莼HSP70mRNA表達量達到最大，是對照組的35倍。不同鹽度(09／00459／00)脅迫處理組中，0％o或59／00鹽度處理組的孔石莼HSP70mRNA表達量是309／00鹽度處理組孔石莼HSP70表達量的3倍。30‰、409／00和459／00鹽度處理組孔石莼HSP70mRNA表達量較低，且無顯著差異。不同紫外線照射時間(O40h)和不同干燥時間

4、(040h)處理組中，孔石莼HSP70mRNA表達量都在3h后達到最高值，之后表達量維持在較高水平。為進一步研究藻類HSP70的生物學功能，將海帶HSP70基因的開放閱讀框區(qū)域克隆到表達載體pEASYE2中，并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)pLysS。將陽性重組子培養(yǎng)于含有√6岣(100U／，mL)的LB培養(yǎng)基，IPTG誘導表達，SDSPAGE電泳鑒定。經(jīng)5h誘導，其表達量達到平臺期，繼續(xù)培養(yǎng)HSP70表達量并不顯著增高。5mMIPT

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