條石鯛發(fā)育早期脂肪酸組成研究【開(kāi)題報(bào)告+文獻(xiàn)綜述+畢業(yè)設(shè)計(jì)】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文系列</b></p><p><b>　　開(kāi)題報(bào)告</b></p><p><b>　　水產(chǎn)養(yǎng)殖</b></p><p>　　條石鯛發(fā)育早期脂肪酸組成研究</p><p>　　一、選題的背景與意義</p><p>

2、;　　條石鯛(Oplegnathus fasciatus，T.&S.)，俗稱日本鸚鵡魚(yú)，隸屬于鱸型目(Perciformes)，石鯛科(Oplegnathidae)，石鯛屬，主要分布于我國(guó)的黃海、東海，日本的北海道以南等海[1]。條石鯛體態(tài)優(yōu)美、色澤艷麗、肉質(zhì)細(xì)嫩、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，是一種具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的海產(chǎn)魚(yú)類(lèi)[2]。條石鯛皮下含有豐富的膠質(zhì)，口感獨(dú)特，深受消費(fèi)者的青睞；其幼魚(yú)體態(tài)優(yōu)美、色澤鮮艷、條紋美麗，具有較高的觀賞價(jià)值。在北

3、方，可采用海上網(wǎng)箱、池塘與室內(nèi)相結(jié)合的養(yǎng)殖模式，南方可以在海上進(jìn)行網(wǎng)箱養(yǎng)殖[3]。隨著其養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，條石鯛在營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值上的重要性也日益凸顯。</p><p>　　人體不能自身合成多不飽和脂肪酸，合理的脂肪酸攝入對(duì)身體健康極為重要。n-3族多不飽和脂肪酸(n-3 PUFA) 中，有代表性的物質(zhì)包括二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)等[4]。EPA和DHA主要來(lái)源于海洋生物或深海魚(yú)類(lèi)，是

4、生理作用最重要的n-3族脂肪酸[5]，對(duì)人體而言，具有降血壓、抗血栓、預(yù)防心血管疾病及抗腫瘤等多種重要的生理功能，在降低血脂、降低心腦血管疾病發(fā)病率方面有顯著作用[6]。研究證實(shí)DHA能直接影響人大腦功能,同時(shí)對(duì)多種疾病如動(dòng)脈粥樣化具有預(yù)防和治療功能[7]。同樣，EPA對(duì)體內(nèi)合成前列腺素和凝血烷等激素具有重要作用[8]。</p><p>　　在能夠提供脂肪酸的營(yíng)養(yǎng)源中，海洋生物和深海魚(yú)類(lèi)富含多不飽和脂肪酸，尤其是

5、EPA和DHA含量比淡水魚(yú)高出許多[9]。通過(guò)研究比較海水魚(yú)類(lèi)各發(fā)育階段的脂肪酸組成與變化,可以闡明該魚(yú)在不同生長(zhǎng)時(shí)期的脂肪酸需求,也可為人工飼料的科學(xué)配方提供理論支持。</p><p>　　目前對(duì)各種海淡水魚(yú)類(lèi)的脂肪酸研究眾多，但對(duì)條石鯛的脂肪酸組成研究方面少有人涉及。本課題擬通過(guò)分析條石鯛卵巢、受精卵、稚魚(yú)、幼魚(yú)以及成魚(yú)體內(nèi)的脂肪酸種類(lèi)、組成以及含量變化規(guī)律，來(lái)探明條石鯛生長(zhǎng)過(guò)程中脂肪酸的積累、轉(zhuǎn)化和利用情況

6、。這對(duì)評(píng)價(jià)條石鯛不同發(fā)育階段的營(yíng)養(yǎng)狀況有重要參考價(jià)值，也可為養(yǎng)殖條石鯛仔魚(yú)開(kāi)口餌料的配制提供理論指導(dǎo)。</p><p>　　二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問(wèn)題：</p><p><b>　?。ㄒ唬┗緝?nèi)容：</b></p><p>　　1. 條石鯛不同發(fā)育階段總脂的測(cè)定；</p><p>　　2. 條石鯛生長(zhǎng)周期中各階

7、段脂肪酸組成特色和規(guī)律分析；</p><p>　　3. 綜合分析不同發(fā)育階段脂肪酸的組成以及變化規(guī)律與生長(zhǎng)環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)需求的關(guān)系。</p><p>　?。ǘM解決的主要問(wèn)題：</p><p>　　1. 關(guān)注條石鯛的特定脂肪酸，是否有某類(lèi)脂肪酸在每個(gè)階段皆出現(xiàn)；</p><p>　　2. 鑒別先天擁有和后天獲得的脂肪酸種類(lèi)。</p>

8、<p>　　3. 早期發(fā)育時(shí)缺少的脂肪酸類(lèi)型，幼魚(yú)階段缺少的種類(lèi)及其與餌料的關(guān)系；</p><p>　　三、研究的方法與技術(shù)路線：</p><p><b>　?。ㄒ唬┭芯糠椒ǎ?lt;/b></p><p>　　1.Bligh-Dyer法：</p><p>　　取1g魚(yú)粉樣品(干樣)，加氯仿和甲醇各2mL，研磨后

9、加入離心管(10mL)。用2mL氯仿沖洗研缽兩次，沖洗液一并加入離心管。再加入3 5mL蒸餾水，搖動(dòng)離心管使之充分混合，以2000r/min離心5min，</p><p>　　分層后取氯仿層轉(zhuǎn)入30mL帶蓋試管中，用氮?dú)獯蹈伞?lt;/p><p>　　2.GC/MS分析：</p><p>　　GC條件：進(jìn)樣口溫度250℃，載氣為純度為99.999%的高純氦，柱流速0.8

10、1 ml/min,柱前壓73.0 KPa,柱起始溫度150 ℃，保持3.5 min，以20 ℃/min升至200 ℃，再以5 ℃/min升至280 ℃，保持37 min。分流進(jìn)樣1μl，分流比50:1；</p><p>　　MS條件：離子源選用電子轟擊（electron impact, EI）源，電子能量為70 eV，離子源溫度200 ℃，接口溫度250 ℃，選取全程離子碎片掃描（SCAN）模式，質(zhì)量掃描范圍為4

11、0~600，溶劑延遲3.5 min。用化學(xué)電離（Chemical Ionization,CI）源分析時(shí)，反應(yīng)氣為甲烷。</p><p><b>　?。ǘ┘夹g(shù)路線：</b></p><p>　　研究的總體安排與進(jìn)度：</p><p>　　2010.1-2010.2 畢業(yè)論文選題</p><p>　　2010.2-2010

12、.3 進(jìn)行文獻(xiàn)查閱和資料收集，制定具體研究計(jì)劃和試驗(yàn)方案</p><p>　　2010.1-2010.4完成開(kāi)題報(bào)告，修訂實(shí)驗(yàn)方案</p><p>　　2010.4-2010.5 文獻(xiàn)綜述與開(kāi)題答辯</p><p>　　2010.6-2010.10 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，數(shù)據(jù)整理、結(jié)果分析</p><p>　　2010.12-2011.2 完成2篇外文翻

13、譯，論文初稿撰寫(xiě)</p><p>　　2011.3-2011.4 按指導(dǎo)教師的意見(jiàn)，反復(fù)修改論文，提交并答辯</p><p><b>　　五、主要參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　[1] 朱元鼎,福建魚(yú)類(lèi)志（下卷）[M].福州：福建科學(xué)技術(shù)出版社,1985,254-255</p><p>　　[2] 武云飛,門(mén)強(qiáng)

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20、養(yǎng)研究進(jìn)展[J].海洋與湖沼,2002,33(4):446-450</p><p>　　[15] Rodriguez C,Perez J A,Lorenzo Aet al.n-3 HUFArequirement of larval gilthead seabreamS auratawhen using high levels of eicosapentaenoic acid[J].Comp Biochem Phy

21、siol, 1994,107A:693—698</p><p>　　[16] 劉鏡恪.海魚(yú)早期階段必需脂肪酸和磷脂的研究現(xiàn)狀與展望[J].海洋水產(chǎn)研究,2002,23(2):58-63[17] Rainuzzo J R,Reitan K I,Olsen Y. The significance of lipids at early stages of marine fish:a review[J]. Aquacu

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23、蘭,蔣企洲,胡磊軍,伊靜.鹵蟲(chóng)中蛋白質(zhì)和脂肪酸組成的研究[J].中國(guó)生化藥物雜志,1997, 18(6): 289-291</p><p>　　[21] 王勝,劉永堅(jiān),田麗霞,等.斜帶石斑仔魚(yú)不同餌料的營(yíng)養(yǎng)分析及其對(duì)生長(zhǎng)和魚(yú)體脂肪酸組成的影響[J].中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2003,42(2):210-213)</p><p>　　[22] 王大志,彭興躍,李少菁,程兆第.海水小球藻

24、脂肪酸組成研究[J].海洋科學(xué),1999,4:68-70</p><p>　　[23] 張利民,常建波,等.n-3多價(jià)不飽和脂肪酸營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化輪蟲(chóng)技術(shù)研究[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),1997,21(4):415-421</p><p>　　[24] 鄭樂(lè)云.不同餌料對(duì)點(diǎn)帶石斑魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)、存活的影響[J].臺(tái)灣海峽,2004,23(3):341-346</p><p>　　[25]

25、 龔小玲,蘇錦祥,段曉英,姜秀鳳.不同餌料培養(yǎng)的輪蟲(chóng)對(duì)假睛東方仔魚(yú)脂肪酸的影響[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué), 1999, 6(3):119-122</p><p>　　[26] 周光正. 餌料對(duì)培養(yǎng)輪蟲(chóng)(Brachionus plicatilis)脂肪酸組成的影響[J]. 海洋科學(xué),1996,5,27-28</p><p>　　[27] 邱小琮, 等. 營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化的輪蟲(chóng)、鹵蟲(chóng)對(duì)牙鲆仔魚(yú)的成活、生長(zhǎng)及

26、體脂肪酸組成的影響[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2004,23(2):4-8</p><p>　　[28] 王丹麗,徐善良,嚴(yán)小軍,等.大黃魚(yú)仔、稚、幼魚(yú)發(fā)育階段的脂肪酸組成及其變化[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),2006,30(2): 241-245.</p><p>　　[29] 薄海波,王霞.堿催化法衍生化氣相色譜/質(zhì)譜法分析青海湖裸鯉魚(yú)油中脂肪酸[J].色譜,2006, 21(2):181- 184.&

27、lt;/p><p>　　[30] Tocher D R,Sargent J R.Analyses of lipids and fatty acids in ripe roes of some Northwest European fish[J].Lipids, 1984,19:492—499</p><p>　　[31] 周光正,王遠(yuǎn)隆,王淑君.海水仔稚魚(yú)對(duì)于n-3高度不飽和脂肪酸需求量的研究

28、現(xiàn)狀[J].海洋湖沼通報(bào),1996(3):72～75.</p><p>　　[32] 馬愛(ài)軍,雷霽霖,陳四清,張秀梅,陳大剛.大菱鲆產(chǎn)卵季節(jié)對(duì)卵子的生物學(xué)及生化特征的影響[J].海洋與湖沼, 2002,33(1),75-80</p><p>　　[33] 楊文鴿.馬面鲀卵巢中磷脂成分與脂肪酸的分析[J].寧波大學(xué)學(xué)報(bào)理工版,2000,13(1):53-56</p><p

29、>　　[34] 王維群.營(yíng)養(yǎng)學(xué)[M].北京:高等教育出版社, 2005: 76-258.</p><p><b>　　畢業(yè)論文文獻(xiàn)綜述</b></p><p><b>　　水產(chǎn)養(yǎng)殖</b></p><p>　　海水魚(yú)類(lèi)早期發(fā)育階段脂肪酸組成及需求概述</p><p>　　摘要：海水魚(yú)類(lèi)中富含人

30、體必須氨基酸、多聚不飽和脂肪酸以及其他礦物元素，研究海水魚(yú)類(lèi)早期發(fā)育階段脂肪酸組成的變化，對(duì)評(píng)價(jià)其營(yíng)養(yǎng)狀況有重要的參考價(jià)值，也可為養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)仔魚(yú)開(kāi)口餌料的配制提供參考。</p><p>　　關(guān)鍵詞：海水魚(yú)；脂肪酸；餌料；早期發(fā)育</p><p>　　1、研究脂肪酸的意義</p><p>　　脂肪酸在生物體生命過(guò)程中具有重要的作用，它們是構(gòu)成人體脂肪和類(lèi)脂的基本物質(zhì)[1

31、]。根據(jù)飽和度的不同，可分為飽和脂肪酸（SFA）、單不飽和脂肪酸（MUFA）、多不飽和脂肪酸（PUFA），它們能夠滿足人體對(duì)亞油酸和亞麻酸等必需脂肪酸的需要、促進(jìn)脂溶性維生素的吸收與利用。其中，PUFA主要包括了n-3，n-6和n-9系列脂肪酸，有重要生物學(xué)意義的是n-3和n-9PUFA，尤其是n-3族多不飽和脂肪酸(n-3 PUFA)，其代表性的物質(zhì)包括二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA) [2]，二者是生理作用最重要的n

32、-3族不飽和脂肪酸[3]，對(duì)人體而言，它們有助于降低血壓、血脂，預(yù)防心血管疾病，具有多種重要的生理功能，在抗血栓、抗腫瘤和降低心腦血管疾病發(fā)病率方面有顯著作用[4]。人體不能自身合成多不飽和脂肪酸，這就使得對(duì)n-3族多不飽和脂肪酸的研究變得非常重要[5]。而在能夠提供脂肪酸的營(yíng)養(yǎng)源中，海洋生物和深海魚(yú)類(lèi)富含多不飽和脂肪酸，尤其是EPA和DHA含量比淡水魚(yú)高出許多[6]。隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，海水魚(yú)類(lèi)仔稚魚(yú)的攝食和營(yíng)養(yǎng)研究已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外研

33、究的重點(diǎn)之一，研究其早期發(fā)育中脂肪酸的組成</p><p>　　2、海水魚(yú)類(lèi)脂肪酸研究概述</p><p>　　2.1 海水魚(yú)類(lèi)卵子脂肪酸成分概述</p><p>　　眾多研究表明,海水魚(yú)類(lèi)卵子的脂肪酸,尤其是n-3長(zhǎng)鏈高度不飽和脂肪酸的含量至關(guān)重要。海水魚(yú)類(lèi)必需的長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸(HUFA)有以下三種: n- 3 系列的二十二碳六烯酸( 22∶6 n- 3; D

34、HA) 和二十碳五烯酸( 20∶5 n- 3; EPA) , n-6 系列的花生四烯酸( 20∶4 n- 6; AA) 。已經(jīng)確定卵子及仔魚(yú)中高含量的n-3不飽和脂肪酸是成功發(fā)育所必需的，20∶4 (n-6)也被認(rèn)為有重要的作用，因?yàn)樗诤Ｋ~(yú)類(lèi)生活史的早期組成了磷脂酰肌醇[7]。在海洋經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)大菱鲆中，n-3系列不飽和脂肪酸和20∶4 (n-6)在卵子成熟過(guò)程中含量顯著增高，可知其對(duì)于仔稚魚(yú)早期發(fā)育的重要性[8]；而在對(duì)另一種養(yǎng)殖

35、魚(yú)類(lèi)馬面鲀的研究中，可以看出其卵巢中含有豐富的長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸，尤其是EPA與DHA之和較高，在總脂達(dá)到14.50%，在磷酸脂肪酸中達(dá)到了20.48%[9]。</p><p>　　海水魚(yú)類(lèi)仔稚魚(yú)必需脂肪酸研究概述</p><p>　　海水魚(yú)類(lèi)的仔稚魚(yú)需要3種必需脂肪酸,即二十二碳六烯酸22∶6n-3 (DHA),二十碳五烯酸20∶5n-3 (EPA)和二十碳四烯酸20∶4n-6(AA).

36、已有的研究表明，正如哺乳動(dòng)物一樣,海水魚(yú)類(lèi)的神經(jīng)細(xì)胞膜和視覺(jué)細(xì)胞膜中含有豐富的DHA。缺乏DHA的鯡魚(yú)(Coregonus hoyi)幼魚(yú),由于視力減弱,在光強(qiáng)較弱的條件下,捕捉食物的能力則會(huì)下降，神經(jīng)和視覺(jué)的發(fā)育不良[10]。相應(yīng)的，EPA也對(duì)海水魚(yú)類(lèi)仔稚魚(yú)神經(jīng)系統(tǒng)的形成有一定影響。AA則是形成魚(yú)類(lèi)磷脂酰肌醇(PI)的重要脂肪酸,雖然含量低,但也有促進(jìn)魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)的作用。AA在刺激蛋白酶過(guò)程中為第二信使，是合成類(lèi)二十烷酸(如前列腺素、白細(xì)

37、胞三烯、血栓烷等)的前體,這些生物活性物質(zhì)具有重要的生理功能,影響生殖、消化和呼吸系統(tǒng),影響膜對(duì)離子的通透性及抑制脂質(zhì)分解等[11].</p><p>　　研究表明，海水魚(yú)類(lèi)對(duì)其體內(nèi)不同種類(lèi)脂肪酸的利用存在先后次序，飽和脂肪酸最先被利用，然后是低不飽和脂肪酸，最后是高不飽和脂肪酸[12]。而海水魚(yú)類(lèi)的仔稚魚(yú)比起成魚(yú)而言，需要更多的n-3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)以滿足其生長(zhǎng)和存活的需求。在相關(guān)的饑餓實(shí)驗(yàn)中，

38、大菱鲆(Scophthalmus maximus)和金頭鯛(Sparus aurata)等魚(yú)類(lèi)，體內(nèi)的飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸是首先被利用的重要能源，其余脂肪酸則按照其飽和度，也就是n-9系列，n-6系列，n-3系列的順序被先后利用。n-3系列中的DHA(22:6n-3)是最后被利用的[13]。</p><p>　　在前人對(duì)處于發(fā)育期的仔魚(yú)進(jìn)行的饑餓實(shí)驗(yàn)中，結(jié)果顯示，DHA是各極性脂中最優(yōu)先被保存下來(lái)的。被保存

39、下來(lái)的DHA在仔魚(yú)攝取外源營(yíng)養(yǎng)后，又被重新吸收形成甘油磷脂中，從而參與生物膜構(gòu)建。除此之外，饑餓的海水魚(yú)類(lèi)仔稚魚(yú)體內(nèi)的廿碳四烯酸，也會(huì)如DHA一般被優(yōu)先保存，這一點(diǎn)說(shuō)明了n-6系列的高不飽和脂肪酸在仔稚魚(yú)發(fā)育中的重要作用[14]。</p><p>　　DHA和EPA對(duì)海水仔稚魚(yú)的生理作用不盡相同，作為必需脂肪酸的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值也有一定差異。研究表明，比起DHA和EPA在總脂中的含量，DHA與EPA的比值對(duì)于仔稚魚(yú)的生長(zhǎng)

40、發(fā)育有著更為重要的意義。當(dāng)海水比目魚(yú)仔稚魚(yú)飼料中DHA∶EPA的比例約為2∶1時(shí),仔稚魚(yú)的生長(zhǎng)和成活率令人滿意[15]；EPA與DHA比例從3.6∶1降低到0.8∶1時(shí),金鯛仔魚(yú)的生長(zhǎng)速度會(huì)進(jìn)一步提高[16]。多方面的研究表明，DHA作為仔稚魚(yú)的必需脂肪酸,比EPA更為重要。高含量的EPA會(huì)導(dǎo)致磷脂結(jié)構(gòu)組成不平衡，影響仔稚魚(yú)的正常生長(zhǎng)[17].由于海水魚(yú)類(lèi)仔稚魚(yú)自身無(wú)法合成DHA與EPA等多種脂肪酸，因此，通過(guò)飼喂餌料生物作為外源營(yíng)養(yǎng)對(duì)

41、其體內(nèi)DHA與EPA的比例進(jìn)行調(diào)控，對(duì)于海水魚(yú)類(lèi)的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖有著重要意義。</p><p>　　餌料生物的選擇及強(qiáng)化</p><p>　　輪蟲(chóng)、鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體作為海水魚(yú)類(lèi)仔稚魚(yú)的餌料，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于苗種生產(chǎn)。研究已證明，隨著餌料中高不飽和脂肪酸含量的提高，海水魚(yú)類(lèi)仔稚魚(yú)體內(nèi)的脂肪酸組成會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)變化，生長(zhǎng)速度、存活率、抗逆能力和應(yīng)激抵抗能力會(huì)隨之提高，從而有利于提高幼體的存活率。因此，使餌料

42、中的高不飽和脂肪酸含量和比例適宜，在海水魚(yú)苗培育中具有重要作用[18]。</p><p>　　但是，由于輪蟲(chóng)和鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體體內(nèi)缺乏DHA，EPA、AA和n-3族多不飽和脂肪酸含量又較低，因此投喂未經(jīng)營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化的輪蟲(chóng)、鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體不利于苗種的成活、生長(zhǎng)以及抗病抗逆能力。生物的脂肪酸組成在很大程度上取決于生物本身的吸收和合成能力，裸腹溞和鹵蟲(chóng)的幼體等其他甲殼類(lèi)合成EPA的能力遠(yuǎn)高于輪蟲(chóng)[19]。鹵蟲(chóng)成體中不飽和脂肪酸較

43、飽和脂肪酸比例大得多，且長(zhǎng)鏈多烯酸含量較高，其中較有價(jià)值的不飽和脂肪酸就包括EPA[20]。海水小球藻的脂肪中也含有較豐富的EPA約占總脂的20%~30%,但缺乏DHA[21-22]。因此，利用含有豐富DHA，EPA，AA，n-3族多不飽和脂肪酸等不飽和脂肪酸的強(qiáng)化劑對(duì)輪蟲(chóng)等餌料生物進(jìn)行強(qiáng)化，是現(xiàn)今海水魚(yú)類(lèi)餌料生物養(yǎng)殖方面的一個(gè)主要方向。</p><p>　　在強(qiáng)化劑的選擇與餌料生物培育方面，前人已做過(guò)多項(xiàng)研究[

44、23-26]。其中，在邱小琮[27]等的實(shí)驗(yàn)中，投喂以不同強(qiáng)化劑強(qiáng)化的輪蟲(chóng)和鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體，顯著地提高了牙鲆仔魚(yú)的成活率，其中又以V強(qiáng)化酵母強(qiáng)化劑的效果最好。海水魚(yú)類(lèi)仔稚魚(yú)攝食強(qiáng)化過(guò)的輪蟲(chóng)和鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體后，體內(nèi)多不飽和脂肪酸含量隨著餌料中含量升高而升高，這正是牙鲆仔魚(yú)生長(zhǎng)速度和成活率提高的重要因素之一。</p><p>　　在海水魚(yú)類(lèi)育苗中的應(yīng)用價(jià)值</p><p>　　目前,我國(guó)養(yǎng)殖的重要

45、經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)，如真鯛(Pagrus major)、黑鯛(Sparus macrocephalus)和牙鲆(Paralichthys o-livaceus)等，在人工育苗過(guò)程中，常有仔稚魚(yú)大量死亡的情況出現(xiàn)，成活率一般低于20%。王丹麗[28]等在對(duì)重要經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)大黃魚(yú)（Pseudosciaena crocea）的研究中，分析了大黃魚(yú)早期發(fā)育階段體內(nèi)脂肪酸的種類(lèi)和相對(duì)含量，并重點(diǎn)比較了發(fā)病稚魚(yú)與正常稚魚(yú)的脂肪酸變化特點(diǎn)。通過(guò)對(duì)其變化規(guī)律的研究得

46、出結(jié)論：導(dǎo)致大黃魚(yú)稚魚(yú)階段經(jīng)常出現(xiàn)的“脹鰾病”發(fā)生的內(nèi)在原因，可能是DHA和EPA的缺乏以及AA偏高。研究結(jié)果為預(yù)防“脹鰾”魚(yú)苗的發(fā)生提供了理論依據(jù)。</p><p>　　仔稚魚(yú)從吸收卵黃內(nèi)源營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)變?yōu)閿z取外源營(yíng)養(yǎng)后，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的缺乏和組成不平衡是導(dǎo)致其大量死亡的一個(gè)重要原因。因此，開(kāi)展仔稚魚(yú)營(yíng)養(yǎng)方面的分析，對(duì)其脂肪酸的組成和餌料攝入進(jìn)行研究，不僅有重要的科學(xué)意義，也有廣闊的應(yīng)用前景。</p><

47、;p><b>　　3、研究及展望</b></p><p>　　研究證實(shí), DHA 能直接影響人類(lèi)大腦功能, 促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶能力; 同時(shí)對(duì)多種疾病( 如動(dòng)脈粥樣硬化和某些腫瘤) 具有預(yù)防和治療功效。EPA 對(duì)體內(nèi)合成前列腺素和凝血烷等激素具有重要作用, 這類(lèi)激素直接參與體內(nèi)滲透壓調(diào)節(jié), 心血管功能和神經(jīng)發(fā)育等[29]。鑒于人體不能自身合成多不飽和脂肪酸，合理的脂肪酸攝入對(duì)身體健康極為重要。

48、</p><p>　　條石鯛（Oplegnathus fasciatus，T.&S.）是一種具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的海產(chǎn)魚(yú)類(lèi)，主要分布于我國(guó)的黃海、東海，日本的北海道以南等海[30]。成魚(yú)體態(tài)優(yōu)美，色澤艷麗，具有較高的觀賞價(jià)值；兼之肉質(zhì)細(xì)嫩、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，口感獨(dú)特，深受消費(fèi)者的青睞[31]。隨著其養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，條石鯛在營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值上的重要性也日益凸顯，對(duì)其進(jìn)行基礎(chǔ)研究顯得尤為重要。</p>

49、<p>　　本課題主要是分析條石鯛未受精卵、受精卵、未開(kāi)口仔魚(yú)、飼喂輪蟲(chóng)后的仔魚(yú)、飼喂鹵蟲(chóng)后的仔魚(yú)、幼魚(yú)以及成魚(yú)體內(nèi)的脂肪酸組成種類(lèi)以及含量變化規(guī)律。這對(duì)于條石鯛養(yǎng)殖的健康可持續(xù)發(fā)展，提高生產(chǎn)者的積極性，以及提高條石鯛養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益有重大的意義。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 周光正,王遠(yuǎn)隆,王淑君.海水仔稚

50、魚(yú)對(duì)于n-3高度不飽和脂肪酸需求量的研究現(xiàn)狀[J].海洋湖沼通報(bào),1996(3):72～75.</p><p>　　[2] 朱碧英,陳全震.魚(yú)油脂肪酸組成及其含量分析[J].東海海洋,1999, 17(2):61-63.</p><p>　　[3] 劉洪祥.食品保健精致魚(yú)油開(kāi)發(fā)[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),1993,5(3):71-78.</p><p>　　[4]

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53、<p>　　[9] 楊文鴿.馬面鲀卵巢中磷脂成分與脂肪酸的分析[J].寧波大學(xué)學(xué)報(bào)理工版,2000,13(1):53-56</p><p>　　[10] Bell M. V., Batty R. S., Dick J. R.et al.Dietary deficiency of docosahexaenoic acid impairs vision at low light intensities

54、in juvenileherring (Clupea harengus L.) [J].Lipids, 1995a,30: 443-449</p><p>　　[11] 沈同,王鏡巖,趙邦悌.生物化學(xué),上冊(cè)[M].北京:高等教育出版社,1980.35-37.</p><p>　　[12] 謝小軍,鄧?yán)?饑餓對(duì)魚(yú)類(lèi)生理生態(tài)學(xué)影響的研究進(jìn)展[J].水生生物學(xué)報(bào),1998,22(2):181-1

55、88.</p><p>　　[13] 劉鏡恪,陳曉琳.海水仔稚魚(yú)的必需脂肪酸——n-3系列高度不飽和脂肪酸研究概況[J]. 青島海洋大學(xué)學(xué)報(bào), 2002,32(6):897-902</p><p>　　[14] 劉鏡恪,周利,雷霽霖.海水仔稚魚(yú)脂類(lèi)營(yíng)養(yǎng)研究進(jìn)展[J].海洋與湖沼,2002,33(4):446-450</p><p>　　[15] Rodriguez

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58、酸在海水魚(yú)苗培育中的作用[J].齊魯漁業(yè),2003,20(12):10-13</p><p>　　[19] 童圣英,姜宏,陳煒.不同培養(yǎng)條件下蒙古裸腹脂肪酸組成比較[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),1998,5(3):58-63.</p><p>　　[20] 徐秀蘭,蔣企洲,胡磊軍,伊靜.鹵蟲(chóng)中蛋白質(zhì)和脂肪酸組成的研究[J].中國(guó)生化藥物雜志,1997, 18(6): 289-291</p&g

59、t;<p>　　[21] 王勝,劉永堅(jiān),田麗霞,等.斜帶石斑仔魚(yú)不同餌料的營(yíng)養(yǎng)分析及其對(duì)生長(zhǎng)和魚(yú)體脂肪酸組成的影響[J].中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2003,42(2):210-213)</p><p>　　[22] 王大志,彭興躍,李少菁,程兆第.海水小球藻脂肪酸組成研究[J].海洋科學(xué),1999,4:68-70</p><p>　　[23] 張利民,常建波.n-3多價(jià)

60、不飽和脂肪酸營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化輪蟲(chóng)技術(shù)研究[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),1997,21(4):415-421</p><p>　　[24] 鄭樂(lè)云.不同餌料對(duì)點(diǎn)帶石斑魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)、存活的影響[J].臺(tái)灣海峽,2004,23(3):341-346</p><p>　　[25] 龔小玲,蘇錦祥,段曉英,姜秀鳳.不同餌料培養(yǎng)的輪蟲(chóng)對(duì)假睛東方仔魚(yú)脂肪酸的影響[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué), 1999, 6(3):119-122&l

61、t;/p><p>　　[26] 周光正. 餌料對(duì)培養(yǎng)輪蟲(chóng)(Brachionus plicatilis)脂肪酸組成的影響[J]. 海洋科學(xué),1996,5,27-28</p><p>　　[27] 邱小琮. 營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化的輪蟲(chóng)、鹵蟲(chóng)對(duì)牙鲆仔魚(yú)的成活、生長(zhǎng)及體脂肪酸組成的影響[J]. 水產(chǎn)科學(xué), 2004,23(2):4-8</p><p>　　[28] 王丹麗,徐善良,嚴(yán)小軍,

62、等.大黃魚(yú)仔、稚、幼魚(yú)發(fā)育階段的脂肪酸組成及其變化[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),2006,30(2): 241-245.</p><p>　　[29] 薄海波,王霞.堿催化法衍生化氣相色譜/質(zhì)譜法分析青海湖裸鯉魚(yú)油中脂肪酸[J].色譜,2006, 21(2):181- 184.</p><p>　　[30] 朱元鼎.福建魚(yú)類(lèi)志(下卷) [M].福州:福建科學(xué)技術(shù)出版社,1985,254-255<

63、/p><p>　　[31] 武云飛,門(mén)強(qiáng),康斌.兩種珍稀魚(yú)類(lèi)的形態(tài)學(xué)和生態(tài)學(xué)的補(bǔ)充研究[J].青島海洋大學(xué)學(xué)報(bào),1999, 29(4): 581-585</p><p><b>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)</b></p><p><b>　　（20_ _屆）</b></p><p>　　條石鯛發(fā)育早期脂肪酸組成研

64、究 </p><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　引言16</b></p><p><b>　　1材料與方法17</b></p><p>　　1.1 樣品采集17</p><p>　　1.2 儀器與試劑17&

65、lt;/p><p>　　1.3 GC/MS分析條件17</p><p>　　1.4 實(shí)驗(yàn)方法17</p><p>　　1.4.1 總脂的提取—Bligh-Dyer法17</p><p>　　1.4.2 皂化18</p><p>　　1.4.3 脂肪酸甲脂化18</p><p>　　1.4.

66、4 GC/MS分析18</p><p>　　1.4.5 脂肪酸的定性測(cè)定19</p><p>　　1.5數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計(jì)與檢驗(yàn)19</p><p><b>　　2 結(jié)果19</b></p><p>　　2.1 各樣品的總脂含量變化19</p><p>　　2.2 脂肪酸的種類(lèi)組成特點(diǎn)2

67、1</p><p>　　2.2.1 未受精卵的脂肪酸組成特點(diǎn)21</p><p>　　2.2.2 胚胎期脂肪酸組成特點(diǎn)22</p><p>　　2.2.3 前仔魚(yú)期脂肪酸組成特點(diǎn)22</p><p>　　2.2.4 后仔魚(yú)期脂肪酸組成特點(diǎn)22</p><p>　　2.2.5 稚魚(yú)期體內(nèi)脂肪酸組成特點(diǎn)22<

68、;/p><p>　　2.2.6 幼魚(yú)期脂肪酸組成特點(diǎn)22</p><p>　　2.3 幾種重要脂肪酸的實(shí)際含量比較22</p><p><b>　　3 討論24</b></p><p>　　3.1 條石鯛發(fā)育早期各階段SFA、MUFA和PUFA的含量變化24</p><p>　　3.2 條石鯛

69、發(fā)育早期各階段主要脂肪酸組成的變化24</p><p>　　3.3 稚魚(yú)期的特點(diǎn)與“脹鰾病”的發(fā)生24</p><p>　　3.4 條石鯛魚(yú)苗脂肪酸組成與其他魚(yú)類(lèi)比較25</p><p>　　3.5 條石鯛魚(yú)苗攝食餌料對(duì)其脂肪酸的影響25</p><p><b>　　4 小結(jié)25</b></p>

70、<p>　　致謝錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)26</b></p><p>　　摘 要：用GC/MS法對(duì)條石鯛發(fā)育早期不同發(fā)育階段（未受精卵、胚胎、前仔魚(yú)期、后仔魚(yú)期-鹵蟲(chóng)、后仔魚(yú)期-輪蟲(chóng)、稚魚(yú)、幼魚(yú)）的脂肪酸組成及含量進(jìn)行了分析研究。共檢測(cè)到28種脂肪酸，其中飽和脂肪酸(SFA)13種，單不飽和脂肪酸(MUFA)7種，多不飽和

71、脂肪酸(PUFA)8種。結(jié)果表明：SFA、MUFA和PUFA的含量在開(kāi)口之前均呈逐漸下降，開(kāi)口之后迅速回升；必需脂肪酸中的∑EPA+DHA含量，在攝食鹵蟲(chóng)階段的稚魚(yú)期最低，但C18:1（油酸）、C18:2(n-6)（亞油酸）和 C18:3(n-3)（亞麻酸）含量則顯著高于其他各階段。此外，還將條石鯛魚(yú)苗脂肪酸組成與其他魚(yú)類(lèi)進(jìn)行了比較分析，并探討了稚魚(yú)期的特點(diǎn)與“脹鰾病”的發(fā)生與預(yù)防。</p><p>　　關(guān)鍵詞：

72、條石鯛；發(fā)育早期；胚胎；仔稚幼魚(yú)；脂肪酸</p><p>　　Abstract: The fatty acid composition and content at different developmental stages (unfertilized stage, embryo stage, prelarval stage, postlarva-rotifer stage, postlarva-artemia

73、 stage, juvenile and fingerling) of the Oplegnathus fasciatus were analyzed by the means of GC/MS. Twenty-eight fatty acids were found, in which there were 13 saturated fatty acids(SFA), 7 monounsaturated fatty acids(MUF

74、A), and 18 polyunsaturated fatty acids(PUFA). The result indicates that the content of SFA, MUFA and PU</p><p>　　Keywords: Oplegnathus fasciatus, developmental stages, embryo, young fish, fatty acid</p>

75、;<p><b>　　引言</b></p><p>　　條石鯛(Oplegnathus fasciatus，T.&S.)，俗稱日本鸚鵡魚(yú)，隸屬于鱸形目(Perciformes)，石鯛科(Oplegnathidae)，石鯛屬（Oplegnathus），主要分布于我國(guó)的黃海、東海，日本的北海道以南等海域[1]。肉質(zhì)細(xì)嫩、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，是一種具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的海產(chǎn)魚(yú)類(lèi)[2]。條

76、石鯛皮下含有豐富的膠質(zhì)，口感獨(dú)特，深受消費(fèi)者的青睞；其幼魚(yú)體態(tài)優(yōu)美、色澤鮮艷、條紋美麗，具有較高的觀賞價(jià)值。在北方，可采用海上網(wǎng)箱、池塘與室內(nèi)相結(jié)合的養(yǎng)殖模式，南方可以在海上進(jìn)行網(wǎng)箱養(yǎng)殖[3]。隨著其養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，條石鯛在營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值上的重要性也日益凸顯，因此對(duì)其進(jìn)行基礎(chǔ)研究顯得尤為重要。</p><p>　　脂肪酸在生物體生命過(guò)程中具有重要的作用。它們是構(gòu)成機(jī)體脂肪和類(lèi)脂的基本物質(zhì)，是細(xì)胞膜磷脂的重

77、要成分，能夠直接調(diào)節(jié)細(xì)胞膜的組成及蛋白質(zhì)與膜內(nèi)受體，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝與酶作用，影響酶活性；與細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子作用，修飾基因表達(dá)；影響mRNA穩(wěn)定性，調(diào)節(jié)酶的表達(dá)[4]。</p><p>　　各種脂肪酸可根據(jù)飽和度的不同分為飽和脂肪酸(SFA)、單不飽和脂肪酸(MUFA）、多不飽和脂肪酸(PUFA)[5]。MUFA可降低血漿總膽固醇、血壓的作用，也可防止記憶下降。動(dòng)物體內(nèi)能夠合成SFA和MUFA，但不能合成亞油酸(C18

78、:2)和亞麻酸(C18:3)等，因此將動(dòng)物維持正常生長(zhǎng)發(fā)育需要而體內(nèi)又不能合成的脂肪酸稱為必需脂肪酸，如亞油酸、亞麻酸、AA、EPA及DHA等[6-7]。人體同樣不能自身合成多不飽和脂肪酸，合理的脂肪酸攝入對(duì)身體健康極為重要。n-3族多不飽和脂肪酸(n-3 PUFA) 中，有代表性的物質(zhì)包括二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)等[8]。EPA和DHA主要來(lái)源于海洋生物或深海魚(yú)類(lèi)，是生理作用最重要的n-3族脂肪酸[9]，對(duì)人體

79、而言，具有降血壓、抗血栓、預(yù)防心血管疾病及抗腫瘤等多種重要的生理功能，在降低血脂、降低心腦血管疾病發(fā)病率方面有顯著作用[10]。研究證實(shí)DHA能直接影響人大腦功能,同時(shí)對(duì)多種疾病如動(dòng)脈粥樣化具有預(yù)防和治療功能[11]。同樣，EPA對(duì)體內(nèi)合成前列腺素和凝血烷等激素具有重要作用[12]。</p><p>　　正因?yàn)轸~(yú)類(lèi)富含人體必須氨基酸、多聚不飽和脂肪酸以及其他礦物元素，一直以來(lái)作為人類(lèi)重要食物和營(yíng)養(yǎng)源。近年來(lái)，隨著

80、人們對(duì)健康與營(yíng)養(yǎng)水平要求提高，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，國(guó)內(nèi)外對(duì)魚(yú)類(lèi)脂肪酸的研究也越來(lái)越廣泛，從魚(yú)類(lèi)中攝取脂肪酸的重要性已日益受到關(guān)注[13]。</p><p>　　海洋生物和深海魚(yú)類(lèi)中富含多不飽和脂肪酸，尤其是EPA和DHA含量比淡水魚(yú)高出許多[14]。國(guó)內(nèi)外有關(guān)魚(yú)類(lèi)脂肪酸營(yíng)養(yǎng)的研究表明，海水硬骨魚(yú)類(lèi)需要高度不飽和脂肪酸，尤其是n-3HUFA是海水仔稚魚(yú)的必需脂肪酸[15]，海水魚(yú)類(lèi)必需的長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸(HUF

81、A)有以下三種：n-3系列的C 22：6(n-3)DHA(二十二碳六烯酸) 和C20：5 (n-3)EPA(二十碳五烯酸)，n-6系列的C20：4(n- 6) (花生四烯酸，AA) [16-18]。海水魚(yú)體組織中DHA和EPA的含量遠(yuǎn)高于AA，因此魚(yú)類(lèi)對(duì)n-3系列不飽和脂肪酸，尤其是DHA、EPA有更高的需求[19]。同時(shí)，研究還表明幼魚(yú)和成魚(yú)對(duì)必需脂肪酸的需求和轉(zhuǎn)化途徑不同，脂肪酸在魚(yú)苗期起著十分重要的作用，特別是高度不飽和脂肪酸中的

82、n-3系列(如DHA、EPA和AA)是海水仔、稚、幼魚(yú)的必需脂肪酸，對(duì)維持細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和機(jī)能的完整性極為重要，而且是構(gòu)成統(tǒng)稱為類(lèi)二十烷酸的高生物活性旁分泌素的前體[20]。通過(guò)研究比較海水魚(yú)類(lèi)各發(fā)育階段的脂肪酸組成與變化,可以闡明該魚(yú)在不同生長(zhǎng)發(fā)育階段的脂肪酸需求，也可為科學(xué)調(diào)配人工配合飼料、配制魚(yú)苗開(kāi)口餌</p><p>　　目前對(duì)各種海淡水魚(yú)類(lèi)的脂肪酸研究眾多，但對(duì)條石鯛的脂肪酸組成研究方面少有人涉及。本課題擬

83、通過(guò)分析條石鯛未受精卵、胚胎、仔魚(yú)前期、仔魚(yú)后期、稚魚(yú)及幼魚(yú)體內(nèi)的脂肪酸種類(lèi)、組成以及含量變化規(guī)律，來(lái)探明條石鯛生長(zhǎng)過(guò)程中脂肪酸的積累、轉(zhuǎn)化和利用情況。這對(duì)評(píng)價(jià)條石鯛不同發(fā)育階段的營(yíng)養(yǎng)狀況有重要參考價(jià)值，也可為條石鯛育苗工藝的完善提供技術(shù)支撐。</p><p><b>　　1材料與方法</b></p><p><b>　　1.1 樣品采集</b>

84、</p><p>　　實(shí)驗(yàn)所用材料于2009年5月,取自寧波市海洋與漁業(yè)研究院橫碼基地。按不同的發(fā)育階段分別采樣，共獲取未受精卵、胚胎、前仔魚(yú)期、后仔魚(yú)期（攝食輪蟲(chóng)，以下簡(jiǎn)稱“后仔魚(yú)期－輪蟲(chóng)”）、仔魚(yú)后期（攝食輪蟲(chóng)和鹵蟲(chóng)，以下簡(jiǎn)稱“后仔魚(yú)期－鹵蟲(chóng)”）、稚魚(yú)、幼魚(yú)等7個(gè)樣品。取樣后立即冷凍，用冰瓶帶回,置于實(shí)驗(yàn)室-76℃的冰箱中保存。</p><p><b>　　1.2 儀器與試劑

85、</b></p><p>　　QP2010氣相色譜-質(zhì)譜分析儀，帶AOC-20自動(dòng)進(jìn)樣器(日本SHIMADZU公司)，30 m×0.25 mm×0.25 μmSPB-50色譜柱(美國(guó)SUPELCO公司)；半自動(dòng)測(cè)序系統(tǒng)(美國(guó)BIO-RAD公司)等；14%BF3-CH3OH溶液和標(biāo)準(zhǔn)脂肪酸甲酯(美國(guó)ALLTECH公司)，色譜純正己烷(美國(guó)TEDIA公司)，其他試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。<

86、;/p><p>　　1.3 GC/MS分析條件</p><p>　　GC條件： 進(jìn)樣口溫度250℃，載氣為純度為99.999%的高純氦，柱流速0.81 mL/min，柱前壓73.0KPa，柱起始溫度150℃，保持3.5 min，以20 ℃/min升至200℃，再以5℃/min升至280℃，保持37 min。分流進(jìn)樣1 L，分流比50:1。</p><p>　　MS條件：

87、 離子源選用電子轟擊(electron impact, EI)源，電子能量為70 eV，離子源溫度200℃，接口溫度250℃，選取全程離子碎片掃描(SCAN)模式，質(zhì)量掃描范圍為40~600，溶劑延遲3.5 min。用化學(xué)電離(Chemical Ionization, CI)源分析時(shí)，反應(yīng)氣為甲烷。</p><p><b>　　1.4 實(shí)驗(yàn)方法</b></p><p>

88、;　　1.4.1 總脂的提取—Bligh-Dyer法</p><p>　　步驟一：把取來(lái)的樣品勻漿以后，放在冷凍干燥機(jī)上徹底干燥；</p><p>　　步驟二：在電子天平上準(zhǔn)確稱量0.1-0.2g左右干樣，把稱來(lái)的干樣放入15mL離心管中，往離心管中加入7.6mL CHCl3/CH3OH/H2O=1:2:0.8的混合液，在超聲波清洗機(jī)中超聲提取2min，然后在旋渦混合器上劇烈振蕩5min；

89、</p><p>　　步驟三：把離心管放入臺(tái)式離心機(jī)中離心，在三千轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速下離心15min，離心完畢后取上層清液，滴入125mL的分液漏斗中；</p><p>　　步驟四：往離心管中的下層樣品再加入7.6mL CHCl3/CH3OH/H2O=1:2:0.8的混合液，在渦旋混合器上劇烈振蕩5mL，然后在超聲清洗機(jī)中超聲提取2mL；</p><p>　　步驟五：重復(fù)步驟

90、三；</p><p>　　步驟六：重復(fù)步驟四-步驟五；</p><p>　　步驟七：向裝有全部上層清液的分液漏斗中加入6mL CHCl3，從而使CHCl3/CH3OH/H2O=2:2:0.8，然后用雙手振蕩分液漏斗中的混合液30s；</p><p>　　步驟八：振蕩完畢后，再向分液漏斗中加入6mL飽和食鹽水，從而使CHCl3/CH3OH/H2O=2:2:2.8，然后

91、用雙手振蕩分液漏斗中的混合液30s；</p><p>　　步驟九：把分液漏斗放到分液漏斗架上，使里面的樣品靜置分層，過(guò)夜，以上下層的液體清晰分開(kāi)即分界面徹底清晰為效果最佳；</p><p>　　步驟十：待分層完畢后，把下層液體轉(zhuǎn)移到蒸發(fā)瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在30℃左右加熱蒸發(fā)蒸發(fā)瓶中的樣品，在蒸發(fā)時(shí)注意不要使瓶中的樣品噴出來(lái)，待蒸發(fā)到一定量時(shí)，把樣品瓶從旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上取下，用少量氯仿把蒸發(fā)瓶中

92、的樣品洗到已知重量的4mL樣品瓶中，用氮?dú)獯档綐悠菲康闹亓康牟辉僮兓春阒貫橹?，然后?mL樣品瓶中充氮?dú)饫鋬霰４妫?lt;/p><p><b>　　1.4.2 皂化</b></p><p>　　步驟一：往4mL樣品瓶中加入2mL 5-6%的KOH甲醇水（V/V=4:1），然后在4mL樣品里吹一分鐘氮?dú)?，把樣品瓶放?0℃的水中皂化2h；</p><p

93、>　　步驟二：皂化完成后，把皂化液轉(zhuǎn)移到15mL離心管中，往離心管中加入1mL的飽和NaCl溶液，用鹽酸（V/V=1：1）調(diào)PH使小于1；</p><p>　　步驟三：用2mL的氯仿:正己烷（V/V=1:4）洗樣品瓶并合并到離心管中，在渦旋混合器上渦旋振蕩數(shù)分鐘，把離心管放入離心機(jī)中以4000r/min離心，離心10min，用吸管把上層液吸到另一個(gè)離心管中；</p><p>　　步驟

94、四：重復(fù)步驟三；</p><p>　　步驟五：再重復(fù)步驟三，得到上層提取液即為脂肪酸；</p><p>　　1.4.3 脂肪酸甲脂化</p><p>　　步驟一：提取液用2mL重蒸水洗一次，然后把離心管放入渦旋振蕩器上振蕩，以4000r/min離心，離心十分鐘，把上層液準(zhǔn)確移入干凈并干燥的4mL樣品瓶中，把樣品瓶放到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸干，在4mL樣品瓶中加入0.5mL

95、BF3甲醇液，往樣品瓶中吹氮?dú)?min，然后放入60℃的水中甲脂化1h；</p><p>　　步驟二：一小時(shí)后把4mL樣品瓶從水中取出，待冷卻后移到干凈并干燥的15mL離心管中，在離心管中加入1mL飽和NaCl溶液；</p><p>　　步驟三：原來(lái)的樣品瓶用2mL正己烷洗到離心管中，在渦旋混合器上渦旋振蕩數(shù)分鐘，把離心管放入離心機(jī)中以4000r/min離心，大約離心十幾分鐘，用吸管把上層

96、液吸到另一個(gè)尖頭離心管中； </p><p>　　步驟四：重復(fù)步驟三；</p><p>　　步驟五：再用3mL氯仿:正己烷（V/V=1:4）抽提一次，合并提取液；</p><p>　　步驟六：往提取液中加入1g無(wú)水硫酸鈉，用滴管準(zhǔn)確移取上層液移入4mL樣品瓶中氮?dú)獯蹈?，?mL正己烷定容到潔凈并干燥的1.5mL樣品瓶中,最后把樣品上GC/MS進(jìn)行分析測(cè)定。</

97、p><p>　　1.4.4 GC/MS分析</p><p>　　GC條件：進(jìn)樣口溫度250℃，載氣為純度為99.999%的高純氦，柱流速0.81 mL/min，柱前壓73.0 KPa，柱起始溫度150℃，保持3.5 min，以20℃/min升至200℃，再以5℃/min升至280℃，保持37 min。分流進(jìn)樣1L，分流比50:1；</p><p>　　MS條件：離子源

98、選用電子轟擊（electron impact, EI）源，電子能量為70 eV，離子源溫度200℃，接口溫度250℃，選取全程離子碎片掃描（SCAN）模式，質(zhì)量掃描范圍為40~600，溶劑延遲3.5 min。用化學(xué)電離（Chemical Ionization, CI）源分析時(shí)，反應(yīng)氣為甲烷。</p><p>　　1.4.5 脂肪酸的定性測(cè)定</p><p>　　在上述分析條件下，每一脂肪

99、酸組分都有各自保留時(shí)間，此保留時(shí)間即為定性依據(jù)之一。從GC-CIMS-TIC圖中各組分的質(zhì)譜，可以初步確定出各組分的分子量；再根據(jù)GC-EIMS-TIC中各組分的離子碎片質(zhì)量譜圖，通過(guò)NIST庫(kù)并參考脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)譜圖可以定性出所有的脂肪酸。</p><p>　　1.5數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計(jì)與檢驗(yàn)</p><p>　　首先使用Excel，對(duì)收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行初步整理和分析，計(jì)算均值與方差；其后，使用SPS

100、S 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行進(jìn)一步分析，即進(jìn)行均值的多重比較。比較時(shí)首先選定因變量和分組變量，再使用LSD法（最小顯著差數(shù)法）和Duncan法（新復(fù)極差法）對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較，最后輸出統(tǒng)計(jì)量，分析其差異。</p><p><b>　　2 結(jié)果</b></p><p>　　2.1 各樣品的總脂含量變化</p><p>　　條石鯛各階段樣品的

101、總脂含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，7個(gè)樣品的總脂含量為92.78±6.45 ~389.91±9.24(mg/g)，飼喂輪蟲(chóng)的仔魚(yú)后期總脂含量最高，約占總量（干樣）的39%。條石鯛在胚胎及仔魚(yú)前期發(fā)育期間，脂肪作為其能量的主要來(lái)源，總脂的絕對(duì)含量由未受精卵的306.00mg/g急劇跌至92.78mg/g。仔魚(yú)后期期攝食輪蟲(chóng)后又迅速回升至389.91mg/g，此后其總脂含量呈逐步遞減趨勢(shì)，至幼魚(yú)期，總脂含量降為292.

102、69 mg/g，相較于仔魚(yú)后期－輪蟲(chóng)期，下跌達(dá)24.93%。</p><p>　　表1 條石鯛各發(fā)育階段總脂含量（mg/g）</p><p>　　Tab.1 Total lipid content in Oplegnathus fasciatus of different developmental stages (mg/g)</p><p>　　注：采用Dun

103、can氏新復(fù)極差檢驗(yàn)法。n=3,表中上標(biāo)字母不同（a、b、c、d、e）表示有顯著差異（P＜0.05）。</p><p>　　Notes: Duncan’s multiple range test. Within a row, means with the same superscript are not significantly different at P<0.05.</p><p&

104、gt;　　表2 條石鯛各發(fā)育階段脂肪酸組成（%）</p><p>　　Tab.2 Fatty acid composition in Oplegnathus fasciatus of different developmental stages (%)</p><p>　　注：采用Duncan氏新復(fù)極差檢驗(yàn)法。n=3,表中上標(biāo)不同字母（a、b、c、d、e、f）表示有顯著性差異（P＜0

105、.05）。</p><p>　　Notes: Duncan’s multiple range test. Within a row, means with the same superscript are not significantly different at P<0.05.</p><p>　　圖1 條石鯛各發(fā)育階段∑SFA、∑MUFA和∑PUFA的百分比含量</p&g

106、t;<p>　　Fig.1 ∑SFA, ∑MUFA and ∑PUFA content in Oplegnathus fasciatus of different developmental stages (%)</p><p>　　2.2 脂肪酸的種類(lèi)組成特點(diǎn)</p><p>　　條石鯛發(fā)育早期各階段脂肪酸組成及百分比含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。從未受精卵開(kāi)始至幼魚(yú)共檢測(cè)出28種脂

107、肪酸，起始碳鏈長(zhǎng)度在14碳～24碳之間。其中飽和脂肪酸(SFA)13種，單不飽和脂肪酸(MUFA)7種，多不飽和脂肪酸(PUFA)8種。SFA、MUFA、PUFA三者百分含量在各階段的變化見(jiàn)圖1。</p><p>　　2.2.1 未受精卵的脂肪酸組成特點(diǎn)</p><p>　　從未受精卵中檢測(cè)出28種脂肪酸，此時(shí)以PUFA為主，占41.23%，在各階段中含量最高；SFA次之，為33.25%；