家蠶BmYippee蛋白的表達和亞細胞定位分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、在對家蠶蛹期cDNA文庫測序分析中，我們獲得一條cDNA序列長度為127.bp，該基因的開放閱讀框(ORF)全長36.bp，編碼121個氨基酸殘基，預測分子量為13.7.kD，等電點為5.91并且具有一個保守的Yippee結(jié)構域。我們將它命名為家蠶Yippee蛋白BmYppee(Yippe.fro.Bomby.mori)，Genbank登錄號為DN236885，我們將其ORF克隆到原核表達載體pET-28a中，構建重組質(zhì)粒，雙酶切鑒定及

2、序列測定正確后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，經(jīng)IPTG誘導表達的重組蛋白以包涵體形式存在，經(jīng)過鎳柱親和層析純化后獲得高純度的目的蛋白His-BmYippee，以該重組蛋白作為抗原免疫新西蘭大白兔制備多克隆抗體，經(jīng)ELISA檢測，抗體效價可達1:8000，Wester.blotting結(jié)果顯示抗體的特異性較好。
　　 提取家蠶各個時期和五齡幼蟲各組織的總RNA分別進行熒光定量PCR分析結(jié)果表明，家蠶發(fā)育時期在蛹期轉(zhuǎn)錄水平最高，卵

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