蓖麻毒蛋白A鏈基因的克隆及重復表達載體的構建.pdf

1、蓖麻是世界十大油料作物之一，具有較高的經(jīng)濟價值與市場地位，被廣泛應用于化工、航空、航天、機械等多個領域。蓖麻籽中存在著毒性物質，限制了蓖麻的綜合開發(fā)利用。蓖麻含有的毒性物質中，以蓖麻毒蛋白毒性最強，它由A、B兩條鏈組成，其中A鏈為效應鏈。利用分子生物學技術，抑制蓖麻蛋白A鏈基因的表達，為培育蓖麻無毒轉基因植株奠定基礎，對蓖麻無毒品種培育、提高蓖麻飼用價值及拓寬蓖麻綜合利用途徑有重要意義。 1.根據(jù)基因Genebank中發(fā)布的RT

2、A基因序列，分別設計4對特異性引物，在兩端分別插入不同的酶切位點。降落PCR法擴增蓖麻毒蛋白A鏈基因，純化RTA-S1，RTA-S2，RTA-AS1、RTA-AS2片段，連接克隆質粒pGEM T-easy，轉化大腸桿菌JM109，經(jīng)菌落PCR及質粒酶切鑒定正確的陽性克隆做序列測定。測序結果顯示，得到的基因片段與源序列高度同源，同源性分別為94％、94％、98％、98％。 2.將序列分析正確的陽性克隆提取質粒，分別酶切回收RTA-