犬β干擾素的基因克隆、原核表達及活性測定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、隨著社會進步和人民生活方式的改變，犬作為伴侶動物已成為人們生活的一部分。犬細小病毒病、犬瘟熱、犬腺病毒感染病毒病嚴重危害養(yǎng)犬業(yè)的發(fā)展，目前無有效的治療藥物，主要用疫苗接種進行預防，但免疫效果欠佳。β干擾素(Interferno-β，IFN-β)等干擾素是由動物細胞產(chǎn)生的一類分泌型糖蛋白，具有廣譜抗病毒和增強免疫作用，可用于犬病毒病的治療。目前臨床上使用的主要是重組大腸桿菌表達的α干擾素，不僅抗病毒譜受到一定限制，而且純化過程復雜，生產(chǎn)成

2、本較高。為了增強干擾素對犬病毒病的治療效果和降低生產(chǎn)成本，本研究將彈性蛋白樣多肽(Elastin-like polypeptide，ELP)-蛋白內(nèi)含肽(intein)介導的新型大腸桿菌表達系統(tǒng)，用于犬β干擾素的表達與純化，現(xiàn)將研究結果報告如下：
　　 ⑴從比格犬耳皮膚組織中提取基因組DNA為模板，通過PCR擴增出犬β干擾素成熟肽編碼序列，將擴增產(chǎn)物克隆于質(zhì)粒載體并進行測序，結果顯示與GeneBnak上公布的犬β干擾素基因同源性

3、為100％。
　　 ⑵將β干擾素成熟肽編碼序列克隆入含ELP與intein融合基因的pET-MIE原核表達載體，將重組表達載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌，用溫敏誘導法誘導重組菌表達，經(jīng)SDS-PAGE分析證明，表達的重組β干擾素以可溶性形式存在，分子量為預期大小相符。
　　 ⑶利用ELP的溫度敏感可逆相變特性，將重組菌的超聲波裂解物在不同的溫度下進行反復離心，獲得純化的ELP-intein-IFN-β融合蛋白；再利用intein的自動

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