農(nóng)桿菌介導(dǎo)AVP1基因轉(zhuǎn)化甜菜的研究.pdf

1、分類號(hào)S566.3學(xué)校代碼10129UDC581學(xué)號(hào)08202001農(nóng)桿菌介導(dǎo)AVP1基因轉(zhuǎn)化甜菜的研究TheStadyonAgrobacteriummediatedTransfmationofSugarBeet(Betavulgaris)withVacuolarHPPase(AVP1)Gene申請(qǐng)人：王曉嬌學(xué)科門類：理學(xué)學(xué)科專業(yè)：植物學(xué)研究方向：作物生理與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：張少英教授論文提交日期：二○一一年五月摘要甜菜是我國(guó)重要的兩

2、大糖料作物之一，并且在發(fā)展我國(guó)制糖業(yè)以滿足日益增長(zhǎng)的食糖需求中將起到重要作用。但最近幾十年里，受自然災(zāi)害和人為因素的影響，一些不利于植物生存的因素不斷產(chǎn)生，比如干旱、鹽堿化、低溫、洪澇以及土壤貧瘠等。在擴(kuò)大甜菜生產(chǎn)規(guī)模上，土壤干旱、鹽堿化、貧瘠將成為制約產(chǎn)量的主要環(huán)境因子，提高甜菜抗逆性是目前和將來(lái)促進(jìn)甜菜生產(chǎn)持續(xù)發(fā)展的重要基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)證明，液泡膜HPPase(AVP1)基因的超表達(dá)能顯著提高轉(zhuǎn)基因植物的抗旱性、耐鹽性和耐土壤貧瘠性，為培

3、育出抗旱、耐鹽堿、耐貧瘠、優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、高糖的甜菜新品系提供了方法和思路。本研究首次利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將AVP1基因轉(zhuǎn)入甜菜，并優(yōu)化了一套高效、穩(wěn)定的遺傳轉(zhuǎn)化體系，運(yùn)用了PCR方法檢測(cè)外源基因已轉(zhuǎn)入甜菜中，獲得轉(zhuǎn)基因植株。同時(shí)，對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了干旱脅迫處理和生理特性鑒定。研究結(jié)果如下：1.甜菜無(wú)菌苗獲得方法：先用砂紙把種殼磨光，再利用濃硫酸、10%NaClO、0.1%HgCl2各浸泡10min，期間用無(wú)菌水進(jìn)行多次沖洗，污染率僅為3.3%

4、，發(fā)芽率為98.9%。新方法具有節(jié)省時(shí)間，節(jié)約種子的優(yōu)點(diǎn)，為開(kāi)展甜菜基因工程奠定了基礎(chǔ)。2.優(yōu)化了甜菜遺傳轉(zhuǎn)化體系：子葉節(jié)預(yù)培養(yǎng)24h、菌液濃度光密度值0.40.5、侵染時(shí)間68min、共培養(yǎng)時(shí)間3648h、Cef500mgL和Kan100mgL的優(yōu)化遺傳轉(zhuǎn)化體系。3.實(shí)現(xiàn)了AVP1基因?qū)μ鸩说倪z傳轉(zhuǎn)化，共獲得抗性苗72株，PCR檢測(cè)獲得轉(zhuǎn)基因植株37株，轉(zhuǎn)化率為11.31%。4.對(duì)部分轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行干旱脅迫處理，測(cè)定非轉(zhuǎn)基因植株和轉(zhuǎn)基