三化螟微衛(wèi)星分子標(biāo)記開(kāi)發(fā)及異步化發(fā)育的初步探索.pdf

1、三化螟Scirpophagaincertulas(Walker)屬鱗翅目、螟蛾科，是水稻單食性、鉆蛀性的本地害蟲(chóng)，廣泛分布于長(zhǎng)江流域以南稻區(qū)，沿江、沿海平原地區(qū)受害尤其嚴(yán)重。然而，目前對(duì)于三化螟的認(rèn)識(shí)還很淺顯，更多的是通過(guò)篩選高效化學(xué)農(nóng)藥來(lái)進(jìn)行防治。本研究針對(duì)三化螟種群結(jié)構(gòu)的內(nèi)穩(wěn)定性，利用抑制PCR富集法分離出三化螟基因組微衛(wèi)星位點(diǎn)，并評(píng)價(jià)及篩選出可以用于后續(xù)遺傳多樣性研究的微衛(wèi)星標(biāo)記;利用AFLP及線粒體COⅠ和核糖體ITS標(biāo)記分析三

2、化螟的異步化發(fā)育，為三化螟內(nèi)穩(wěn)定性機(jī)制的研究、螟害系統(tǒng)控制對(duì)策的開(kāi)辟提供理論基礎(chǔ)，主要結(jié)果如下:
　　(1)采用抑制PCR的方法成功構(gòu)建了三化螟的微衛(wèi)星文庫(kù)。挑取的201個(gè)陽(yáng)性克隆測(cè)序結(jié)果表明，187個(gè)克隆含有微衛(wèi)星序列，抑制PCR篩選微衛(wèi)星序列的準(zhǔn)確率達(dá)到93.03％。對(duì)該187個(gè)微衛(wèi)星序列進(jìn)行比對(duì)，得到18個(gè)不同的微衛(wèi)星序列，并成功提交至GenBank。對(duì)這18個(gè)序列設(shè)計(jì)了30對(duì)特異性引物，經(jīng)檢測(cè)，有10對(duì)引物能擴(kuò)增出穩(wěn)定的產(chǎn)

3、物。
　　(2)利用開(kāi)發(fā)出的10對(duì)微衛(wèi)星引物對(duì)四川德陽(yáng)種群48個(gè)個(gè)體進(jìn)行擴(kuò)增，篩選出的5個(gè)三化螟微衛(wèi)星引物，其擴(kuò)增效率達(dá)95％以上，5個(gè)位點(diǎn)的等位基因數(shù)（A）從11到17不等。該種群的觀察雜合度(HO)在0.021到0.532之間，預(yù)期雜合度（HE）在0.837到0.914之間，Shannon's多樣性指數(shù)在2.0348～2.4943之間，Nei's基因多樣性指數(shù)在0.8349到0.9119之間，說(shuō)明供試個(gè)體之間存在豐富的遺傳多樣

4、性。Hardy-Weinberg平衡測(cè)試顯示該種群顯著偏離平衡，進(jìn)一步分析表明，造成偏離平衡的因素可能是雜合度不足。連鎖不平衡測(cè)驗(yàn)顯示5個(gè)位點(diǎn)之間均存在連鎖不平衡。所有的微衛(wèi)星座位沒(méi)有明顯的遺傳變異。
　　(3)利用AFLP技術(shù)研究分析2010年及2011年三化螟早發(fā)類和遲發(fā)類之間的差異，結(jié)果顯示該兩年中種群內(nèi)個(gè)體之間的遺傳一致度總體較高，遺傳相似系數(shù)（Gs值）介于0.71～0.84，范圍較小，遺傳變異不太明顯。根據(jù)遺傳相似系數(shù)，

5、非加權(quán)算術(shù)平均聚類(UPGMA)結(jié)果發(fā)現(xiàn)三化螟種群內(nèi)出現(xiàn)明顯的分化，極端早發(fā)類和極端遲發(fā)類各自聚為一類。主坐標(biāo)分析和聚類分析結(jié)果基本一致。但這些數(shù)據(jù)僅從統(tǒng)計(jì)上說(shuō)明三化螟存在異步化發(fā)育，其關(guān)鍵作用機(jī)制有待繼續(xù)研究。
　　(4)利用COⅠ和ITS序列試圖探索三化螟早發(fā)和遲發(fā)類之間的差異，對(duì)特異性引物擴(kuò)增出的三化螟早發(fā)和遲發(fā)個(gè)體COⅠ和ITS序列進(jìn)行比對(duì)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)供試三化螟極端早發(fā)類和極端遲發(fā)類之間無(wú)明顯差異。說(shuō)明，該二段基因與三化