轉(zhuǎn)基因大豆分子檢測(cè)技術(shù)方法的建立與應(yīng)用.pdf

1、隨著生物基因工程技術(shù)的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因技術(shù)在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展中起著不可替代的作用，越來(lái)越多轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物，在全球范圍內(nèi)大面積種植。
　　本文以轉(zhuǎn)基因大豆為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)轉(zhuǎn)基因的檢測(cè)方法進(jìn)行初步的研究。大豆是人類(lèi)食品中主要的植物蛋白來(lái)源，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)十分重要的農(nóng)作物之一，但隨著人們生活水平的提高，大豆的產(chǎn)量逐漸開(kāi)始無(wú)法滿(mǎn)足人們的生活需求，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)是增加大豆產(chǎn)量最有效的途徑之一。自首次報(bào)道大豆成功轉(zhuǎn)化以來(lái)，很多研究人員相繼進(jìn)行大豆轉(zhuǎn)化方面的成

2、功報(bào)道。隨著轉(zhuǎn)基因作物商業(yè)化的種植，轉(zhuǎn)基因作物的安全性，引起了人們的密切關(guān)注。因此，為了消費(fèi)者的權(quán)益，轉(zhuǎn)基因植物的檢測(cè)是轉(zhuǎn)基因研究的必須環(huán)節(jié)，只有準(zhǔn)確地檢測(cè)轉(zhuǎn)基因含量以及成分，才能有效的對(duì)轉(zhuǎn)基因作物進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控。本文主要工作如下:
　　1.用定性PCR方法檢測(cè)了轉(zhuǎn)基因大豆中CaMV35啟動(dòng)子，NOS終止子，NPTⅡ基因等通用元件，初步判斷是否為陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因大豆，為后面特異性的定性檢測(cè)奠定基礎(chǔ)。
　　2.根據(jù)轉(zhuǎn)基因大豆目基因Gm

3、CBL和NAC5和CaMV35S啟動(dòng)子序列設(shè)計(jì)兩個(gè)引物，建立了轉(zhuǎn)基因大豆GmCBL和NAC5的品系特異定性PCR檢測(cè)方法.這種方法所檢測(cè)的PCR產(chǎn)物既包含了作物基因組序列，又包含了目的基因的序列，是高度特異的，并對(duì)其PCR產(chǎn)物檢測(cè)測(cè)序驗(yàn)證，排除了由于植物花椰菜花葉病毒感染等因素所導(dǎo)致的假陽(yáng)性結(jié)果。
　　3.在定性檢測(cè)的基礎(chǔ)上，以轉(zhuǎn)基因大豆Gm7α亞基為研究對(duì)象，利用絕對(duì)定量的實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆的拷貝數(shù)，以Tubul