豬囊尾蚴小熱休克蛋白的免疫原性分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、利用反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)從豬囊尾蚴總RNA中擴增出小熱休克蛋白(small heat shock protein,sHSP)基因,測序證實所克隆的基因序列與國外報道的豬囊尾蚴sHSP基因序列同源性為99.4％.將該基因克隆至原核表達載體pGEX-4T-1,在大腸桿菌BL21中以GST融合蛋白的形式表達,SDS-PAGE分析證明,表達產物為64ku的融合蛋白,呈可溶性表達,經凝膠掃描、Gel-Pro Analyzer分析,

2、表達量約占菌體可溶性蛋白的30％.免疫學分析(Western blotting、ELISA)結果表明,sHSP能與豬囊尾蚴血清反應.將表達產物電泳后切膠回收免疫小鼠,進行Western blotting和間接ELISA檢測,其抗血清能與豬囊蟲粗抗原及純化的sHSP重組融合蛋白產物發(fā)生免疫學反應,這為探索新的免疫重組抗原和研制多分子疫苗提供理論依據和實驗材料.利用生物信息學技術蛋白質專家分析系統對sHSP基因翻譯后加工修飾預測,發(fā)現豬囊尾

3、蚴sHSP有10個O-連糖基化位點.糖基化對蛋白質的分子量有一定的影響,也對免疫活性有影響,且有糖基化程度越高影響越大的趨勢<'[1]>.同時預測其還有18個磷酸化位點,sHSP轉錄誘導活性的獲得可能依賴于其磷酸化,以往研究證實,sHSP的磷酸化位點通常位于幾個較為保守區(qū)域內的絲氨酸和蘇氨酸殘基上,熱休克的程度越高,它們就越易被磷酸化,從而導致較高水平的轉錄誘導,并能維持較長的時間<'[2]>.這說明糖基化、磷酸化作用在sHSP實現其生

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