Mda-7基因?qū)m頸癌Hela細胞生長及凋亡的影響.pdf

1、目的:研究mda-7基因?qū)m頸Hela細胞生長及凋亡作用。 方法:采用DNA重組技術(shù)，構(gòu)建mda-7真核表達載體pCDNA3.1(一)-mda-7，用電擊法將重組質(zhì)粒及空載體轉(zhuǎn)染宮頸癌Hela細胞，用G418篩選mda-7基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染克隆。經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)鑒定mda-7mRNA表達后，用MTT法檢測Hela細胞的體外增殖能力、hoechst33258熒光染色和流式細胞術(shù)檢測宮頸癌Hela細胞的凋亡。 結(jié)果

2、: 1.經(jīng)G418篩選，一周后陰性對照組全部死亡，空載體組和mda-7組形成少量細胞克隆，兩周時空載體組和mda-7組形成大量細胞克隆。 2.半定量RT-PCR法三組Hela細胞中都可見mda-7mRNA的表達，陰性對照組、空載體組及mda-7組Hela細胞中mda-7 mRNA相對表達水平分別是(0.56±0.003、0.55±0.007、0.92±0.005)。三組Hela細胞中mda-7 mRNA相對表達水平比較，

3、差異具有統(tǒng)計學意義(F=5280.849，P<0.001)?？蛰d體組和陰性對照組細胞中mda-7mRNA相對表達水平比較，無顯著性差異(P>0.05)，兩者與mda-7組細胞之間mda-7mRNA相對表達水平比較，有顯著性差異(P<0.05)。 3.MTT比色法Mda-7組和空載體組Hela細胞的吸光度值相比，具有顯著性差異(P=0.000)，Mda-7組和陰性對照組的Hela細胞相比，具有顯著性差異(P=0.000)，陰性對照

4、組和空載體組的Hela細胞相比，差異無明顯統(tǒng)計學意義(P=0.149)。與空載體組和陰性對照組相比，mda-7組的Hela細胞的體外增殖最慢，而空載體組和陰性對照組的生長曲線幾乎平行。 4．Hoechs染色法空載體組和陰性對照組細胞核形態(tài)正常，而實驗組(Mda-7組)中Hela細胞皺縮、體積變小、核固縮、邊聚形成半月小體，可見凋亡細胞和凋亡小體。 5．流式細胞儀法陰性對照組、空載體組和實驗組(mda-7組)的Hela細胞

5、的早期凋亡率分別是(6.9﹪、8.13﹪、20.12﹪)。三組HeLa細胞早期凋亡率比較，差異具有統(tǒng)計學意義(F=350.499，P<0.05)。Mda-7組的早期凋亡率分別與陰性對照組、空載體組相比較，差異具有明顯的統(tǒng)計學意義(P<0.05)。陰性對照組和空載體組的凋亡率比較，差異無明顯的統(tǒng)計學意義(P=0.053)。 結(jié)論: 1．穩(wěn)定轉(zhuǎn)染mda-7基因的宮頸癌Hela細胞體外生長受限。 2．Mda-7基因?qū)m