氯丙嗪?jiǎn)为?dú)及與順鉑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞生長(zhǎng)影響的研究.pdf

1、目的： 探討氯丙嗪(Chlorpromazine,CPZ)對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞體外生長(zhǎng)的抑制作用及其相關(guān)機(jī)制，同時(shí)觀察氯丙嗪聯(lián)合抗癌藥物順鉑(Cisplatin，DDP)對(duì)Hela細(xì)胞的體外作用。從而探討其抗癌療效，評(píng)價(jià)氯丙嗪治療宮頸癌的安全性、可行性，以期對(duì)藥物治療宮頸癌提供新思路、新方法。 方法：選取人宮頸癌Hela細(xì)胞為研究對(duì)象。實(shí)驗(yàn)分三組，即氯丙嗪、順鉑、氯丙嗪與順鉑聯(lián)合組。1采用四甲基偶氮唑藍(lán)(tetrzol

2、ium-based colorimetric assay，MTT)比色法觀察不同濃度的氯丙嗪分別作用24h、48h、72h對(duì)Hela細(xì)胞增殖的影響，測(cè)定吸光度(OD)值。不同濃度的氯丙嗪作用Hela細(xì)胞48h后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡細(xì)胞百分率、細(xì)胞周期的改變以及凋亡基因Bax、Bcl-2表達(dá)量的改變：DNA凝膠電泳分析DNA片段的變化。2不同濃度各組藥物作用48h后，采用MTT比色法檢測(cè)對(duì)Hela細(xì)胞增殖的影響，測(cè)定OD值； HE染色分析

3、細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；鏈親和素免疫組化法(S-P法)檢測(cè)細(xì)胞p53的表達(dá)量變化。 結(jié)果： 1 MTT結(jié)果顯示：一定濃度的氯丙嗪在一定范圍內(nèi)能明顯抑制Hela細(xì)胞的增殖，且隨氯丙嗪濃度的升高和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制作用明顯升高，呈現(xiàn)出明顯的濃度依賴性和時(shí)間依賴性。分別用氯丙嗪、順鉑及聯(lián)合用藥處理細(xì)胞48h后，氯丙嗪在濃度為10<'-7>mol／L、10<'-6>mol／L、10<'-5>mol/L、10<'-4>mol/L時(shí)對(duì)

4、Hela細(xì)胞的抑制率分別為22.74.％、41.69％、51.39％、67.45％，與對(duì)照組(加入等量培養(yǎng)液)比較，差異有非常顯著性(P<0.01)；順鉑在濃度為0.2 μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L和2.0μmol/L時(shí)對(duì)Hela細(xì)胞的抑制率為43.88％、48.59％、61.49％和71.52％；兩者合用可大大提高對(duì)Hela細(xì)胞的抑制作用，抑制率分別為49.70％、63.52％、70.42％、76.15％，明顯

5、高于單純應(yīng)用相同濃度的順鉑組。 2 流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果分析：流式細(xì)胞儀檢測(cè)Hela細(xì)胞周期分布和凋亡顯示，10<'-7>、10<'-6>。10<'-5>、10<'-4>mol/L氯丙嗪處理Hela細(xì)胞48h后，隨藥物濃度的增加，G<,0>/G<,1>期細(xì)胞逐漸增多，S期和G<,2>/M期細(xì)胞則逐漸減少，即氯丙嗪可阻滯Hela細(xì)胞周期于G<,1>期，該作用呈劑量-效應(yīng)依賴關(guān)系；10<'-7>、10<'-6>、10<'-5> mol/

6、L氯丙嗪作用Hela細(xì)胞48h后，出現(xiàn)典型的亞二倍體凋亡峰，依氯丙嗪濃度增大而逐漸增高，凋亡百分率分別為：5.03％、9.35％、23.85％；流式細(xì)胞儀間接分析細(xì)胞Bax、Bcl-2的蛋白表達(dá)顯示，10<'-7>、10<'-6>、10<'-5>mol/L氯丙嗪作用Hela細(xì)胞48h后，Bax的熒光指數(shù)FI值隨處理濃度增大而逐漸增大，Bcl-2的熒光指數(shù)Fl值隨處理濃度增大而逐漸減小，對(duì)于每一種蛋白，其實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的FI值，均具有顯著

7、性差異(P<0.01)。 3 DNA凝膠電泳結(jié)果分析：10<'-7>、10<'-6>、10<'-5>、10<'-4>mol/L氯丙嗪處理Hela細(xì)胞48h后，提取的DNA表現(xiàn)為典型的階梯狀排列條帶(DNA ladder)，而對(duì)照組則沒(méi)有出現(xiàn)。 4 HE染色結(jié)果分析：細(xì)胞核染藍(lán)紫，胞漿染粉紅色。隨藥物濃度增大，Hela細(xì)胞由不規(guī)則形漸變圓，出現(xiàn)核固縮、濃聚、斷裂后形成的凋亡細(xì)胞，呈致密紫藍(lán)色大小不等的顆粒。順鉑組，當(dāng)濃

8、度為0.5μmol/L時(shí)，可見(jiàn)凋亡細(xì)胞；而兩藥聯(lián)合組，當(dāng)順鉑濃度為0.2μmol/L時(shí)，便出現(xiàn)上述表現(xiàn)。 5 免疫組化法(S-P)分析Hela細(xì)胞p53基因蛋白表達(dá)變化的結(jié)果：P53蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核內(nèi)。氯丙嗪組，p53蛋白的表達(dá)呈升高趨勢(shì)，當(dāng)濃度為10<'-7>mol/L時(shí)，p53蛋白染色細(xì)胞核的光密度值(OD)為0.1240±0.0551，當(dāng)濃度升高至為10<'-5>mol/L時(shí)，OD值為0.2020±0.0626，與對(duì)

9、照組比較，差異具有顯著性(P<0.01)。順鉑組，p53蛋白的表達(dá)進(jìn)一步上升，當(dāng)濃度為0.5μmol/L時(shí)，光密度值為0.2260±0.0691，與對(duì)照組比較，具有顯著性差異(P<0.01)。兩藥聯(lián)合組p53蛋白的表達(dá)明顯增強(qiáng)，OD值升高明顯，即最低濃度(10<'-7>mol/L)氯丙嗪與最低濃度(0.2μmol/L)順鉑聯(lián)合作用后，OD值達(dá)到0.2560±0.0305，與對(duì)照組相比，具有極其顯著性差異(P<0.01)。與對(duì)應(yīng)濃度順鉑處