雷公藤紅素抑制結腸癌HCT-116細胞生長及其機制的實驗研究.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分、雷公藤紅素抑制結腸癌HCT-116細胞生長及其機制的研究 目的：研究雷公藤紅素(celastrol，CSL)對結腸癌HCT-116細胞體外生長和凋亡的影響，并初步探討可能的作用機制。 方法：采用不同濃度(0.875-7.OumoVL) CSL處理結腸癌HCT-116細胞，四氮唑藍(MTT)法檢測CSL對HCT-116細胞的生長抑制效應，流式細胞術(FCM)、透射電鏡觀察CSL對細胞周

2、期變化和凋亡的誘導作用，熒光底物法測定細胞蛋白酶體活性改變，免疫印跡法( Western blot)檢測P27、Bax、P53蛋白的表達。 結果：(1) MTT法顯示一定濃度的CSL可以抑制HCT-116細胞的生長，并隨著濃度的增加和作用時間的延長而明顯增強(P<0.05)。(2)流式細胞術檢測HCT-116細胞經(jīng)CSL作用24h后，細胞周期G0/G1期細胞比例上升，G2/M期細胞比例下降，細胞有明顯凋亡，并呈現(xiàn)濃度依賴性(P<

3、0.05)。(3)逶射電鏡結果顯示，7.Oy.mol/L CSL作用于HCT-116細胞24小時后，部分細胞出現(xiàn)細胞核固縮，局部空泡化，染色質呈新月狀邊集等凋亡形態(tài)學特征。(4)熒光底物法測定CSL作用HCT-116細胞16h，糜蛋白酶活性明顯下降，并呈現(xiàn)濃度依賴性(P<0.05)。(5) Westem blot檢測顯示CSL作用HCT-116細胞24h后，P53、P27、Bax蛋白表達明顯增加，并呈現(xiàn)濃度依賴性(P<0.05)。

4、 結論：(1)CSL可以以時間、濃度依賴方式抑制結腸癌HCT-116細胞生長，并阻滯細胞周期，誘導細胞凋亡。(2) CSL的抗腫瘤作用的分子機制可能與抑制HCT-116細胞的蛋白酶體活性，進而導致P53、P27、Bax蛋白表達增加有關。 第二部分、CSL對5-Fu抗HCT-116細胞的化療增敏效應 目的：觀察CSL是否能夠增加HCT-116細胞對5-Fu的敏感性，并初步探討可能的作用機制。 方法：以MTT法觀察

5、CSL單藥及聯(lián)合5-Fu作用后對HCT-116細胞生存率的影響，流式細胞術檢測細胞凋亡率變化，Western blot檢測IкB蛋白的表達。 結果：(1) MTT法顯示CSL與5-Fu聯(lián)合應用較單用對HCT-116細胞生存率明顯下降(P<0.05)。(2)流式細胞術檢測發(fā)現(xiàn)CSL、5-Fu均可以誘導細胞凋亡，聯(lián)合用藥比單獨用藥凋亡明顯增強(P<0.05)。(3) Western blot檢測表明CSL可以抑制5-Fu引起的核轉錄