CD40L對人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116生長抑制作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究CD40L對體外培養(yǎng)的人結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞株增殖和凋亡的影響，并探討其作用機(jī)制。
　　 方法：采用不同濃度（0.1ug/ml、0.5ug/ml、1.0ug/ml、2.0ug/ml、3.0μg/ml）的CD40L處理處于對數(shù)生長期的結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，MTT比色法測定計(jì)算各實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞的生長抑制率，流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測CD40L對HCT-116細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響，R

2、T-PCR.半定量法檢測VEGF、bcl-2及fasmRNA的表達(dá)水平，Western Blot法測定腫瘤細(xì)胞中細(xì)胞內(nèi)VEGF、Bcl-2及Fas蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：（1）MTT法顯示一定濃度的CD40L可抑制HCT-116細(xì)胞增殖，抑制作用呈時(shí)間和劑量依賴性，實(shí)驗(yàn)組與對照組及各實(shí)驗(yàn)組之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。（2）FCM結(jié)果顯示，HCT-116經(jīng)CD40L作用48小時(shí)后，細(xì)胞有明顯凋亡，且隨濃度的增加和

3、作用時(shí)間延長而增強(qiáng)，G2/M期細(xì)胞比例上升，G0/G1期細(xì)胞比例下降，呈劑量依賴性（p<0.05）。（3）RT-PCR法顯示，HCT-116細(xì)胞的fas mRNA隨CD40L濃度增加而表達(dá)增加，VEGF、bcl-2 mRNA隨藥物濃度增加表達(dá)下降（p<0.05）。（4）Western Blot法結(jié)果顯示，隨著不同濃度的CD40L處理48h后，HCT-116細(xì)胞中VEGF、Bcl-2蛋白表達(dá)下降，F(xiàn)as蛋白表達(dá)升高（p<0.05）。