DNA甲基化檢測(cè)基因芯片方法的研究.pdf

1、位于某些基因啟動(dòng)子區(qū)域和第一外顯子區(qū)域的CpG島經(jīng)常出現(xiàn)異常甲基化，這種異常甲基化是失活或激活該基因的重要原因，而這些基因的異常表達(dá)逐步被認(rèn)為是導(dǎo)致腫瘤出現(xiàn)的主要機(jī)制之一。本論文在調(diào)研已有的基于基因芯片技術(shù)的甲基化檢測(cè)方法基礎(chǔ)上，對(duì)基因芯片高通量的檢測(cè)能力做了進(jìn)一步探索，提出了三類(lèi)高通量的DNA甲基化檢測(cè)方法。 基于熒光雜交的DNA，甲基化芯片檢測(cè)方法。在甲基化特異性微陣列檢測(cè)方法基礎(chǔ)上，采用熒光雜交技術(shù)發(fā)展了一種用于定量分析基

2、因甲基化模式的寡聚核苷酸芯片。設(shè)計(jì)的6組寡核苷酸探針，覆蓋了IGFBP7基因的啟動(dòng)子區(qū)上的18個(gè)CpG位點(diǎn)，共檢測(cè)了15對(duì)乳腺癌組織，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明所有樣本位點(diǎn)甲基化程度都在85％以上，與亞硫酸氫鹽測(cè)序法檢測(cè)結(jié)果一致。此外，發(fā)展了一種基于雙色熒光雜交的高通量分析甲基化檢測(cè)芯片，旨在低成本高效率分析大量樣本以利于有效篩選生物標(biāo)記物。此技術(shù)成功地檢測(cè)27個(gè)樣本的IGFBP7基因的甲基化狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明這種方法對(duì)于大規(guī)模甲基化定量分析具有較好

3、的應(yīng)用前景。 基于化學(xué)發(fā)光尼龍膜雜交的DNA甲基化芯片檢測(cè)方法。本研究綜合了尼龍膜固定DNA量大且固定效率高以及地高辛檢測(cè)靈敏度高的特性，實(shí)現(xiàn)了對(duì)乳腺癌腫瘤樣本的甲基化高靈敏度檢測(cè)。通過(guò)直接參比陰性和陽(yáng)性PCR產(chǎn)物的方法對(duì)檢測(cè)的靈敏度進(jìn)行了研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明這種方法能夠有效地高靈敏度檢測(cè)大規(guī)模低甲基化程度的樣本。 基于滾環(huán)擴(kuò)增的DNA甲基化檢測(cè)方法。滾環(huán)擴(kuò)增是新近發(fā)展起來(lái)的一種恒溫核酸擴(kuò)增方法，具有高特異性，高靈敏度，高