全反式維甲酸對甲狀腺相關眼病球后成纖維細胞增殖的影響.pdf

1、目的：觀察全反式維甲酸(all trans-retinoic acid，ATRA)對體外培養(yǎng)的球后成纖維細胞(retroocular fibroblasts，RF)增殖的影響以及ATRA誘導RF凋亡的作用。為ATRA應用于甲狀腺相關眼病(Thyroidassociated ophthalmopathy，TAO)的治療提供理論依據(jù)。 方法：體外培養(yǎng)TAO患者RF細胞；將不同濃度的ATRA(0、10-9mmol/L、10-8mmol

2、/L、10-7mmol/L、10-6mmol/L和10-5mmol/L)作用于RF細胞分別達24h、48h和72h后，于倒置相差顯微鏡下觀察各時間段各組細胞形態(tài)學變化，并用噻唑藍(MTT)比色法觀察ATRA對細胞增殖的影響，采用流式細胞儀檢測ATRA處理48h后細胞周期的改變及細胞凋亡的百分率；檢測ATRA處理48h后細胞內(nèi)bc1-2蛋白的表達水平。 結(jié)果：體外培養(yǎng)的球后成纖維細胞生長良好，傳代穩(wěn)定，細胞呈梭形或分枝狀，細胞培養(yǎng)

3、24h后，倒置相差顯微鏡下觀察各組細胞形態(tài)均無明顯變化。10-9mmol/L藥物組即使在72h后細胞形態(tài)仍未發(fā)現(xiàn)顯著改變。10-8mmol/L、10-7mmol/L藥物組培養(yǎng)72h后及10-6mmol/L、10-5mmol/L藥物組培養(yǎng)48h后，可觀察到部分細胞形態(tài)發(fā)生改變，細胞散在分布，形態(tài)變得不規(guī)則且折光性減弱，胞漿中出現(xiàn)顆粒樣物質(zhì)：72h后，10-6mmol/L、10-5mmol/L藥物組細胞輪廓明顯加深，細胞老化，生長停滯。MT

4、T法顯示ATRA能降低RF細胞的光吸收值(A值)，細胞生長抑制率隨作用時間和藥物濃度的增加而增加。流式細胞儀檢測ATRA作用于RF細胞后，將細胞周期阻滯在G1期；ATRA可誘導細胞的凋亡，隨著濃度的增加凋亡率顯著增高；流式細胞儀檢測ATRA作用于RF細胞后bc1-2蛋白的表達水平較正常對照組細胞明顯下調(diào)。 結(jié)論： 1.ATRA能夠抑制RF細胞的增殖，其抑制細胞增殖作用具有時間和劑量依賴性； 2.ATRA是通過將細