HIF-1α在宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變的表達及意義.pdf

1、宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅女性患者的健康和生命。其發(fā)病率居女性惡性腫瘤第二位，僅次于乳腺癌。近年來其發(fā)病率呈明顯上升并且有年輕化趨勢，隨著陰道鏡等篩查方法的普及，使宮頸癌易于早期診斷，早期治療，而且手術、放療、化療等治療方法的改進與提高使宮頸癌的死亡率大為下降。盡管如此，子宮頸癌患者總的生存率僅維持在40％左右。新近研究表明，缺氧是腫瘤發(fā)生惡性轉化和轉移的始動因素。缺氧誘導因子-1α(hypoxia-induciblef

2、actor 1，HIF-1α)是缺氧條件下廣泛存在于哺乳動物和人體內(nèi)的一種轉錄因子，其活性對維持腫瘤細胞的能量代謝、心血管生成、促進腫瘤增殖和轉移起著重要作用。宮頸癌的發(fā)生是一個緩慢的過程，一般宮頸癌前病變發(fā)展成宮頸癌，大約需要十年甚至更長時間。因此我們從分子水平探討宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展，希望能為阻斷其向惡性發(fā)展并為其治療提供新的方向。雖然HIF-1α在宮頸癌中的表達近期已有報道，但在宮頸液基細胞中的表達和二者的相關性的研究國內(nèi)外報道較少

3、。本實驗用免疫組織化學，免疫印跡，逆轉錄聚合酶鏈反應的方法檢測HIF-1α在宮頸組織和宮頸液基細胞中的表達情況，判斷HIF-1α在宮頸癌中的表達特征，為揭示宮頸癌發(fā)生機理、進一步了解其生物學行為、判斷預后、選擇合理的治療方案提供幫助。 方法： 1、免疫組織化學方法采用過氧化物酶標記的鏈酶卵白素進行組織染色(S-P法)。結果判定：HIF-1α的陽性信號位于細胞核和(或)細胞漿，被染成淺黃色、棕黃色或黃褐色顆粒。HIF-1α

4、表達以細胞染色強度和細胞陽性百分率得分之和進行判定。隨機選擇5個高倍鏡視野(400×)進行判斷：無染色計0分；弱染色(淺黃色)計1分；中等染色(棕黃色)計2分；強染色(黃褐色)計3分。細胞陽性率≤5％計0分，5％～25％計1分，25％～50％計2分，>50％計3分。上述二項相加，0分為陰性(-)，1-2分為(1+)，3～4分為(2+)，5～6分為(3+)。 2、Western blot取新鮮樣品加5倍裂解緩沖夜，剪碎、勻漿超聲處

5、理，高速低溫離心提取上清蛋白，電泳，轉印，經(jīng)封閉后加相應的一抗、二抗及顯色試劑檢測。結果判定為轉印膜上出現(xiàn)棕色蛋白條帶，并測定蛋白條帶的灰度值。 3、RT-PCR設計引物，提取RNA，測OD值，進行逆轉錄和PCR反應，PCR產(chǎn)物電泳。結果判定為瓊脂糖凝膠上出現(xiàn)亮帶并測定灰度值。 4、統(tǒng)計學分析應用SPSS 11.0軟件包進行統(tǒng)計學分析。采用卡方檢驗分析HIF-1α表達與臨床病理因素關系及在不同宮頸病變中的意義。采用t檢驗