顆粒酶B基因mRNA在心臟移植急性排斥反應期的表達.pdf

1、背景與目的：心臟移植已成為治療終末期心臟病的最主要的行之有效的方法，雖然已廣泛應用如環(huán)孢素A、FK-506、硫唑嘌呤等免疫抑制藥物，但心臟移植術后的主要并發(fā)癥仍是排斥反應，而急性排斥反應是排斥反應中最常見的一種類型。治療的關鍵在于如何早期確定急性排斥反應的嚴重程度以確定是否需用免疫抑制藥物，在移植物造成細胞性損傷前逆轉排斥反應，而目前缺乏理想的特異性監(jiān)測及診斷方法。同種異體移植的急性免疫排斥反應是由多種細胞因子、效應細胞間復雜相互作用的

2、結果.其中細胞免疫應答是急性移植排斥的主要原因。細胞毒性T細胞(cytotoxicTlymphocyte，CTL)是主要的效應細胞。現(xiàn)代移植免疫學研究發(fā)現(xiàn)，在CTL殺傷供體細胞的過程中，穿孔素(perforin,PF)與顆粒酶(granzyme,Gzm)起了重要作用。本試驗通過建立改良的Ono大鼠心臟腹腔異位移植模型，應用半定量逆轉錄聚合酶聯(lián)反應(reversetranscriptase-polymerasechainreactionR

3、T-PCR)動態(tài)檢測在移植排斥反應過程中，心肌組織與外周血中的顆粒酶B基因mRNA的表達，以探討顆粒酶B基因mRNA表達水平對心臟移植急性排斥反應的診斷價值。 方法：用成年清潔級近交封閉群雄性大鼠，250～300克，建立改良的Ono式大鼠腹腔異位心臟移植模型。設A組：Wistar到Wistar,為同系移植對照組；B組：SD到Wistar，為同種移植試驗組，每組35只。各組分別在術后1、3、5、7、9天抽取下腔靜脈血進行半定量RT

4、-PCR，采集移植心臟進行半定量RT-PCR及組織病理學檢查，檢測顆粒酶B基因mRNA和急性排斥反應。 結果：1.在B組心肌組織中，各時間點均檢測到了顆粒酶B基因mRNA的表達，其表達隨著排斥反應程度的升高持續(xù)升高，至術后第9天達到高峰，各時間點之間存在顯著性差異(P＜0.05)。而A組顆粒酶B基因mRNA持續(xù)呈低水平表達，各時間點之間的比較無顯著性差異(P＞0.05)。各時間點A組與B組相比，差異具有統(tǒng)計學意義(第1天P＜0.

5、05，第3、5、7、9天P＜0.01)。 2.B組外周血中，術后第一天亦可檢測到少量顆粒酶B基因mRNA的表達，且隨著排斥反應程度的升高，其表達逐漸上升，至術后第9天達到高峰，各時間點之間存在顯著性差異(P＜0.05)。A組顆粒酶B基因mRNA始終呈低水平表達，各時間點之間無顯著性差異(P＞0.05)。B組與A組相比，術后第一天組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，此后隨著反應程度的加重，3、5、7、9天均有統(tǒng)計學意義(P＜0.

6、01)。 3.A組在術后1-9天，移植心肌組織結構基本正常，各時間點心肌病理變化較一致，明顯輕于B組。僅有少量單核細胞及淋巴細胞浸潤。B組在術后第1天，僅見心外膜下有少量淋巴細胞及單核細胞浸潤，心肌細胞無壞死。第3天心外膜下浸潤細胞增多，心內膜下及心肌膜心肌間質出現(xiàn)單核細胞及淋巴細胞浸潤，間質充血水腫。心肌細胞無壞死。第5天心肌各層均見大量單核細胞及淋巴細胞浸潤，呈多灶性分布。此時可見個別心肌細胞呈凝固性壞死。第7天心肌各層大量

7、單核細胞及淋巴細胞浸潤，心肌間質充血水腫?？梢娸^多的心肌細胞結構破壞，變性壞死。術后第9天心肌全層彌漫浸潤單核細胞及淋巴細胞，心肌間質出血，大量心肌細胞呈凝固性壞死。B組與A組相比，1、3天的心肌組織病理學改變無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，而5、7、9天的組織改變有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。 結論：1.大鼠心臟移植急性排斥反應的組織病理學改變主要表現(xiàn)包括：淋巴細胞和單核細胞的浸潤、心肌間質充血水腫以及心肌細胞壞死。 2